文档介绍:——蛋白质的透析
透析实验
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实验原理
透析是膜技术的一种,利用透析膜可以选择性的透过一定大小分子,从而将待分离纯化的物质和杂质离子分离开。
透析膜是半透膜,蛋白质是大分子物质,它不能透过透析膜,而小分子物质可以自由通过透析膜与周围的缓冲溶液进行溶质交换,进入到透析液中。
常见的透析有:蛋白质的透析和糖类的透析。
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透析装置(原理图)
透析装置和透析过程示意图
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实验仪器
磁力搅拌器
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器材与试剂
器材:透析袋 ,烧杯,玻璃棒,磁力搅拌器,试管及试管架。
试剂:饱和***化钠溶液,10%***溶液,1%***银溶液,10%氢氧化钠溶液,1%硫酸铜溶液。
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操作步骤
透析袋的处理:一般是将透析袋剪成10~20cm的小段,在2%(W/V)NaHCO3和1mmol/L的EDTA()中煮沸10min,用蒸馏水彻底洗尽透析袋,然后放在1mmol/L的EDTA()中煮沸10min,用蒸馏水彻底洗尽透析袋,冷却后,存放于4℃,从此时起取用透析袋,必须戴手套
检查透析效果的方法:用1% BaCl2检查(NH4)2SO4,用1%AgNO3检查NaCl、KCl等
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操作步骤
装样
取一段透析袋10~15cm,将其一端用棉绳扎死,由开口端加入约5ml待透析的样品溶液(蛋白质***化钠溶液),开口端用棉绳扎死,放入盛有蒸馏水的烧杯中,系于一横放在烧杯的玻璃棒上。
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操作步骤
透析
用磁力搅拌器搅拌促进溶液交换。透析过程中需要更换洗脱溶液数次(约15min一次),