文档介绍：基因工程常规技术聚合酶链式反应
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(polymerase chain reaction, PCR)
聚合酶链反应
Section Four
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一、什么是PCR ?
是体外核酸扩增技术。1985年美国PE-. Mullis 等发明的。
DNA是由四种碱基按互补配对原则组成的螺旋双链。在细胞内， DNA复制时，解螺旋酶首先解开双链让它变成单链做为模板，然后，RNA聚合酶合成一小段引物（primer）结合到DNA模板上，最后， DNA合成酶以这段引物为起点，合成与DNA模板配对的新链
PCR就是在体外模拟DNA复制的过程，它用加热的办法让DN***段变性变成两条单链，让人工合成两个引物结合到DNA模板两端， DNA聚合酶即可以大量复制该模板。
它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点
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AGAACTT
TCTTGAA
AGAACTT
TCTTGAA
TCTTGAA
AGAACTT
亲代DNA
子代DNA
二、 PCR的基本原理
DNA的复制 (replication)
由亲代DNA合成两个相同的子代 DNA的过程
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（一）原理
在模板、引物、4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下，特异扩增位于两段已知序列之间的DNA区段的酶促合成反应
PCR反应扩增的是一对引物之间的DN***段
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（二）基本过程
变性：加热使双链DNA变为单链
退火：降温使引物和互补模板在局部 形成杂交链
延伸：耐热DNA聚合酶按5′→3′方向催化以引物为起始点的延伸反应
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（三）PCR基本反应
以DNA为模板的反应
反应体积：50~100μL
buffer
引物一对
底物：4种dNTP
模板：102~105拷贝
耐热DNA聚合酶（ TaqDNA聚合酶）
矿物油
模板DNA的用量可根据其分子量的大小调整
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