文档介绍：基因工程的基本操作程序.
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基因工程的基本操作程序主要包括
四个基本步骤：
1）目的基因的获取
2）基因表达载体的构建
3）将目的基因导入受体细胞
4）目的基因的检测与鉴定
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步骤一：目的基因的获取
目的基因是人们所需要转移或改造的基因,
获取目的基因是实施基因工程的第一步。
如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。
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目的基因的提取方法
直接分离基因
人工合成基因
反转录法
根据已知的氨基酸序列合成DNA
：鸟枪法
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1 . 鸟枪法（散弹射击法）
用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞提供的外源DNA的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（即扩增），从中找出含有目的基因的细胞，再利用一定发方法将目的基因的DN***段分离出来。
用限制酶切断成许多片段
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1）反转录法：
以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。
目的基因的mRNA
单链DNA(cDNA)
双链DNA
(即目的基因)
反转录
合成

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2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法：
根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。
蛋白质的氨基酸序列
mRNA的核苷酸序列
结构基因的核苷酸序列
推测
推测
目的基因
化学合成
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上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？
优点
缺点
鸟枪法
反转录法
根据已知氨基酸合成DNA法
操作简便广泛使用
工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因
专一性强
操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高
专一性最强
仅限于合成核苷酸对较少的简单基因
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