文档介绍：基因工程的基本操作程序
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基因工程基本操作的四个步骤
1、目的基因的获取
2、基因表达载体的构建
3、目的基因导入受体细胞
4、目的基因的检测与鉴定
有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。
使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用
载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。
才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。
基因工程的基本操作程序
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一、目的基因的获取
1
目的基因主要是编码蛋白质的基因：
如：与生物抗性相关的基因、与优良品质相
关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、
与毒物降解相关的基因、与工业用酶相关的
基因、具调控作用的因子等。
2
获取目的基因的常用方法：
1、从已有物种中分离：如从基因文库中获取
2、利用PCR技术扩增目的基因
3、人工合成目的基因
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1. 从基因文库中获取目的基因
1). 基因文库的概念:
将含有某种生物不同基因的许多DN***断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。
基因文库的种类:
基因组文库：含有一种生物的全部基因
部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，
如：cDNA文库
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基因组文库
1. 从基因文库中获取目的基因
各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。受体菌群包含了这种生物所有的基因，该受体菌群称为这种生物的基因组文库。
受体菌群包含了一种生物部分基因。
部分基因文库
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1
概念：
PCR全称为_______________，是一项
在生物____复制___________的核酸合成技术。
2
模板DNA；两种引物；4种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）；ATP等
多聚酶链式反应
体外
特定DN***段
3
前提：
已知目的基因的一段核苷酸序列
原理：
DNA复制
条件：
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4 PCR技术的操作过程
a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板高温解旋，_____断裂，形成________
b、复性（55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。
c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的________。
氢键
单链DNA
双链
DNA链
：每重复一次，目的基因增加___倍，成指数形式扩增（2n)。
一
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PCR技术的操作过程
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PCR技术扩增与DNA复制的比较
DNA复制
PCR技术
场所
原理
条件
解旋方式
酶
特点
结果
碱基互补配对原则
碱基互补配对原则
四种脱氧核苷酸、模板、酶、ATP、适宜的温度和PH
四种脱氧核苷酸、模板、酶、 ATP 、适宜的温度和PH、两种引物
DNA在高温下变性解旋
解旋酶催化解旋
半保留复制、边解旋边复制
半保留复制、全解旋再复制
体外复制
主要在细胞核内
大量的DN***段
形成整个DNA分子
热稳定的DNA聚合酶
细胞内的DNA聚合酶、解旋酶等
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