文档介绍：对羟基苯甲酸酯的分析
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2021/10/14
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一、实验目的
学****高效液相色谱仪器的基本使用方法。
理解和掌握高效液相色谱分离分析基本原理。
学会用外标法和校正归一化法进行色谱定量分析。
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二、HPLC 简介
1967年，高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography，HPLC)正式问世。
高压：流动相为液体，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压，300～600×105 Pa。
高速：分析速度快、通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。
高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。
高灵敏度：紫外检测器可达10-9g／mL，荧光检测器可达
10-11g ／mL 。
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HPLC应用广泛
由于HPLC分离分析的高灵敏度、定量的准确性，特适于非挥发性和热不稳定组分的分析，因此，在医药、食品、农业、生命科学、化工、环保等领域都有着广泛的应用。
如氨基酸、蛋白质、核酸、碳水化合物、药品、多糖、高聚物、农药、抗生素、胆固醇、金属有机物等分析，大多是通过HPLC来完成的。
各种HPLC方法的应用范围及对象
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液相色谱（HPLC）
气相色谱（GC）
相同点
色谱柱可反复使用，分离效能高，高灵敏度，进样量小，分析速度快，使用范围广
分析对象
高沸点、不稳定的天然产物、生物大分子、高分子化合物、离子型样品
气体、沸点较低、热稳定性好的化合物
流动相
不同极性的液体（有一定亲和作用）
惰性气体（无亲和性，只起运载作用）
温度
一般室温
较高
检测器
紫外吸收检测器（光电二极管阵列检测器），荧光检测器，电化学检测器，蒸发光散射检测器，质谱检测器，示差折光检测器
氢火焰离子化检测器（FID），热导检测器（TCD)，氮磷检测器（NPD），火焰光度检测器（FPD），电子捕获检测器（ECD)等类
HPLC与GC的比较
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Agilent 1100仪器结构图
手执控制器
检测器
柱温箱
自动进样器
泵
脱气机
溶剂柜
三、Agilent-1100 液相色谱仪
高压输液系统：单元、双元、
四元泵
进样系统：手动、自动
分离系统：C18、C8色谱柱
检测系统：检测器
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1、高压输液系统
储液器：
～2L的玻璃瓶（白色、棕色）。
脱气装置：
将气体从溶剂中除去，离线脱气和在线真空脱气。
高压输液泵：
恒压泵、恒流泵
恒流泵使用最广泛，有单活塞和双活塞往复泵。
流量准确、可调，～2 mL/min，泵最大流量范围为5～10mL/min（排气泡）。
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流动相
HPLC 级溶剂
水为超纯水
过滤 ( μm, μm最好)
脱气，尤其在低流速时
相溶
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液相色谱手动进样器
2、进样系统
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准备时，流动相直接进柱，进样口1与定量管连接，样品充满定量管后，多余样品从2流出。
进样时，泵将流动相压入定量管，将样品全部携带进入色谱柱分析。
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