文档介绍：生物化学实验报告
姓 名：
学 号：
专业年级：
组 别：
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量
实验日期 实验地点
合作者 指导老师
评分 教师签名 批改日期
一、实验目的
. 学****醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法；
. 了解电泳技术的一般原理；
. 掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量的方法。
二、实验原理
. 血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于 。它们在 的缓冲液
中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所
带的电荷量不同，在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋
白（ Albumin) 、α 1- 球蛋白、α 2- 球蛋白、β - 球蛋白、γ - 球蛋白 5 条区带。
. 血清中不同蛋白质的等电点、分子量及含量
血清蛋白质
等电点
分子量
占总蛋白的％
清蛋白
69,000
57
～ 72
α1－球蛋白
200,000
2
～ 5
α2－球蛋白
300,000
4
～ 9
β－球蛋白
90,000
～150,000
～12
γ－球蛋白
～ 156,000
～950,000
12
～ 20
缓冲液 pH=，pI ＜pH。
血清蛋白带负电荷，在电场中向正极移动。
预测血清蛋白电泳区带图
血清蛋白依次分为清蛋白，球蛋白的α 1、α 2、β、γ五个区带
. ①膜条经过氨基黑 10B 染色后显出清晰色带； ②各色带蛋白质含量与染料结合
量基本成正比；③可将各色带剪开，分别溶于碱性溶液中；④用分光光度法计算各种蛋
白质的百分数。
三、材料与方法：
. 实验材料：
. 实验试剂：①样品：健康人血清（新鲜、无溶血）；②巴比妥 - 巴比妥钠缓
冲液（ ，离子强度 ）；③氨基黑 10B 染色液；④漂洗液；⑤洗脱液：
溶液。
. 实验器材： ①V-1100 分光光度计（× 1）；②恒温水浴箱（× 1）；③试管（×
6）、试管架（× 1）；④ 1000μ L 加样枪（× 1）、加样枪架（× 1）；⑤醋酸纤维薄膜
2cm*8cm，厚度 120μ m）；⑥培养皿（× 5）；⑦点样器或载玻片（× 1）；⑧平头镊子（× 2）