文档介绍：ELISA检测技术
ELISA 技术
酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA),是利用抗体分子能与抗原分子特异性结合的特点,将游离的杂蛋白和结合于固相载体的目的蛋白分离,并利用特殊的标记物对其定性或定量分析的一种检测方法。
ELISA 技术的三个基本原理
抗原或抗体能物理性地吸附于固相表面,并且保持其免疫活性;
抗原或抗体能与酶通过共价键形成酶结合物,同时保持各自的免疫活性和酶活性;
酶结合物与相应的抗原或抗体结合后,能通过加入底物的颜色反应来确定免疫反应的发生,颜色反应的深浅与标本中相应抗原或抗体的量成正比。
ELISA 的分类、原理和操作
竞争法
原理:通过a组和b组显色的差异,来确定标本中待测蛋白的量
加酶标记抗原
加底物显色
优点:
1、待测抗原只需一个免疫结合位点,适合小分子抗原如激素和药物之类;
2、操作步骤简单快捷,只需一个保温洗涤过程。
缺点:
1、酶标记抗体的用量大;
2、定量检测的灵敏度和重复性存在不足。
双抗夹心法
双抗夹心法
改良双抗夹心法
优点:
1、待测抗原需要两个或两个以上的免疫结合位点,所以适合大分子抗原的检测,一般在分子量5000D以上;
2、由于增加了一层抗体,提高了特异性检测的灵敏度,尤其是改良的双抗加心法;
3、重复性提高。
缺点:
1、操作复杂,费时费力。
抑制性测定
间接法测抗原

此方法操作简单、迅捷但重复性一般较差;通常用于抗体效价的测定和某些疾病的早期诊断。