文档介绍：液相色谱分析
*
第一页，共52页
第四章 高效液相色谱分析
第一节 概述
第二节 HPLC仪器
第三节 高效液相色谱法的类型及分离原理
第四节 色谱分离方法的选择
第五节 高效毛细管电泳简介
第六节 纸层析和薄层层析
*
第二页，共52页
教学目标及要求
1、掌握高效液相色谱法的特点及适用范围，与GC及经典LC的异同。
2、掌握高效液相色谱仪的主要部件及基本流程。
3、理解常用检测器的原理、适用的分析对象及适用范围。
4、理解各种分离方式的原理及选择原则。
5、了解高效毛细管电泳基本原理、仪器及特点。
6、了解纸层析和薄层层析分离过程、操作技术及特点。
*
第三页，共52页
第一节 概述
高效液相色谱（HPLC）是一种以液体为流动相的快速分离分析色谱技术，采用细微粒固定相、高压输液泵和高灵敏度检测器，具有高压、高速、高效、高灵敏度的特点，对于那些沸点高，热稳定性差，相对分子质量大的有机化合物如烷烃、烯烃、芳烃、染料、甾族化合物、蛋白质、氨基酸、核酸等均可进行分离分析。
按照固定相不同分为：液液分配色谱；吸附色谱（液固色谱）；离子交换色谱；尺寸排阻色谱（凝胶渗透色谱）；离子色谱、平板色谱（薄层色谱）等。
*
第四页，共52页
1. 高效液相色谱与经典液相色谱方法的比较
高压： HPlC供液压力和进样压力都很高（150～350X105Pa）。高压是的一个突出特点。
高速：HPLC采用高压输液设备，流速大增加，分析速度极快，只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需时数小时。
高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀、传质阻力小，因而柱效很高。可以在数分钟内完成数百种物质的分离。
高灵敏度：检测器灵敏度极高：UV——10-9g, 荧光检测器——10-11g。
*
第五页，共52页
2. HPLC与GC的比较
分析对象及范围：GC分析只限于气体和低沸点的稳定有机化合物（占总数的20%）；HPLC可分析高沸点、高分子量的稳定或不稳定有机化合物（占80%）。
流动相的选择：GC采用的流动相为几种“惰性”气体，只起运载作用，对组分作用小；HPLC采用的流动相为液体或各种液体的混合（供选择的机会多）。它除了起运载作用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争，即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改进分离。
操作温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行。
*
第六页，共52页
3. 应用
极性增加
不溶于水
溶于水
非极性
离子
非离子极性
吸附
反向分配
分配
正向分配
离子交换
尺寸排阻
凝胶渗透
凝胶过滤
分
子
量
*
第七页，共52页
第二节 HPLC仪器
*
第八页，共52页
HPLC仪器包括：
高压输液装置 →进样系统 →分离系统→ 检测系统
此外还配有梯度淋洗、自动进样和数据处理装置。
梯度淋洗
*
第九页，共52页
1. 高压输液系统
1）贮液器：1-2L的玻璃瓶，配有溶剂过滤器(Ni合金)，其孔径约2 m，可防止颗粒物进入泵内。
2）脱气：超声波脱气或真空加热脱气。溶剂通过脱气器中的脱气膜，相对分子量小的气体透过膜从溶剂中除去。
3）高压泵：
要求：密封性好、输液流量稳定无脉动、可调范围宽、耐腐蚀。
输液泵种类：恒压型和恒流型。
*
第十页，共52页