文档介绍：分类号 密 级
U D C 单位代码 10733
甘肃农业大学
硕 士 学 位 论 文
猪源 Bb 生物被膜态和浮游态的比较蛋白组学及
相关蛋白特性
Comparative proteomic analysis between biofilm and planktonic cell
of porcine source Bordetella bronchiseptica and characteristics of
related proteins
宁建刚
指导教师姓名 胡永浩 教授 （甘肃农业大学 兰州 730070）
指导教师姓名 邢小勇 教师 （甘肃农业大学 兰州 730070）
学科专业名称 预防兽医学研究方向 动物传染病学及病原分子生物学
论文答辩日期 2017 年 5 月 22 日 学位授予日期 2017 年 6 月
答辩委员会主席 朱启运 研究员
评 阅 人 薛惠文 副教授
郑亚东 副研究员
2017 年 5 月
甘肃农业大学 2017 届硕士学位毕业论文 摘要
摘 要
支气管败血波氏杆菌是一种革兰氏阴性菌，能长期或终生感染哺乳动物的呼
吸道，引起猪萎缩性鼻炎、犬窝咳、兔鼻塞等呼吸系统疾病。生物被膜能够增强
细菌对外界环境的抵抗力，逃避宿主的免疫防御机制；在感染部位不易被清除，
导致宿主的持续性感染；而且能够抵制抗生素的作用，使膜内微生物耐药性增加
一千倍；据统计约 80%以上的细菌性疾病过程中细菌是以生物被膜状态存在的，
但是对于生物被膜的形成机制在国内外尚无统一明确的认识，有待进一步深入研
究，同时也没有从生物被膜的层面去挖掘更有价值的保护性抗原，因此，通过优
化该菌的生物被膜形成条件，确定生物被膜形成的最佳条件并观察其被膜结构，
而后应用比较蛋白组学从蛋白水平揭示生物被膜的形成机制，并对相关蛋白的特
性进行研究，为生物被膜的形成机制以及疫苗的开发提供科学依据。
1 猪支气管败血波氏杆菌生物被膜的体外优化及结构观察
为确定影响支气管败血波氏杆菌生物被膜的形成条件，本研究采用体外定性
与定量两种方法对 1 株猪源支气管败血波氏杆菌在不同条件下(时间、***化钠浓
度、pH、葡萄糖、蔗糖、乳糖)产生的生物被膜的差异进行了研究，同时对生物
被膜的结构进行观察。结果发现 24 h 为支气管败血波氏杆菌生物被膜成熟稳定
期，***化钠浓度超过 %后，生物被膜形成量逐渐下降，培养基 pH 略偏碱性时
有利于支气管败血波氏杆菌生物被膜的生长，乳糖能够促进支气管败血波氏杆菌
生物被膜的生成。显微镜观察到 24 h 后网格状的生物被膜已经形成，并且趋于
稳定。
2 猪支气管败血波氏杆菌生物被膜态和浮游态比较蛋白组学分析
本试验通过双向电泳比较了支气管败血波氏杆菌处于生物被膜态和浮游态
下全菌蛋白的表达差异，结果发现在生物被膜态的全菌蛋白中，有 15 个蛋白点
表达上调，9 个蛋白点表达下调。选取 7 个上调的蛋白点进行质谱鉴定，发现上
调的蛋白点主要有延伸因子、超氧化物歧化酶、分子伴侣等，功能主要体现在应
激，调控，代谢方面。该结果从蛋白质水平上深化了对细菌生物被膜形成机制的
研究，并为生物被膜的防控和深入研究提供科学依据。