酶联免疫吸附试验.ppt

文档介绍：酶联免疫吸附试验
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免疫标记技术
定义：
将抗原-抗体反应与标记技术相结合，用放射性同位素、酶或荧光素等标记已知抗体或抗原，通过检测标记物，间接测定未知的抗原或抗体。
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放射免疫技术
荧光免疫技术
酶标记技术
发光免疫技术
金标免疫技术
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酶免疫技术概述
1、概念
以酶作为标记物标记试剂抗原或试剂抗体，抗原抗体反应后，通过检测酶促反应产物，以检测相应抗体或抗原的分析方法。
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酶免疫技术概述2、分类
酶免疫组化 用于检测组织切片或细胞涂片中的抗原和抗体
酶免疫技术 均相酶免疫测定
酶免疫测定 固相酶免疫测定
异相酶免疫测定 （ELISA）
液相酶免疫测定
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酶免疫技术概述
3、酶免疫测定的特点
几乎所有的可溶性抗原系统均可以检测
酶免疫测定具有高度的敏感性和特异性，它的最小可测定值达ng甚至p***平
标记试剂比较稳定，且无放射性危害
操作简便，可进行大批量标本的测定，自动化程度高
既可定性测定又可定量测定
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酶免疫技术概述
4、应用
广泛应用于免疫相关性疾病的诊断
微量蛋白质检测
酶和同工酶检测
肿瘤标志物检测
激素（肽类和非肽类）检测
药物和毒物检测
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第一节 概 述
一、常用的酶及其底物：
（一）酶选择的要求
①活性高，纯度高
②作用专一性强
③性质稳定，易与抗原或抗体偶联
④测定方法简便易行、敏感、精确
⑤酶和底物对人体无害
⑥酶和底物价廉易得
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（二）常用的酶和底物
（HRP）和底物
（1)来源: HRP在蔬菜作物辣根中含量很 高，纯化方法也不复杂。
（2）催化反应 : D2 H+H2 O2 — D+ 2H2O
D2 H为色素原，D为色素。
（3）底物 : 四***联苯***（TMB）、邻苯二***（OPD）等。
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TMB经酶作用后由无色变蓝色，目测对比鲜明，加酸终止反应后变黄色，可在比色计中定量。(450nm)
OPD灵敏度高，比色方便，其缺点是配成应用液后稳定性差，而且具有致异变性。
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2. 碱性磷酸酶（ALP）和底物
（1)来源
大肠杆菌提取，；
牛肠粘膜提取，。
（2）催化反应及底物
对硝基苯磷酸酯 +H2O—对硝基酚 +磷酸
(405nm)
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