PCR扩增DNA.ppt

文档介绍：DNA 多聚酶链式反应扩增 DNA 片断课题 2 课题背景?(一)、 PCR 技术的概念是一种体外迅速扩增 DNA 片段的技术,它能以极少量的 DNA 为模板, 在几小时内复制出上百份的 DNA 拷贝?(二)、 PCR 技术的应用?遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和 DNA 序列测定 1、生物体内进行 DNA 复制所需条件: 模板: __________________ 原料: __________________ 酶: __________________ 能量: _______ 引物: __________________ DNA 的两条母链四种脱氧核苷酸解旋酶、 DNA 聚合酶 DNA 或RNA 片段 ATP 基础知识 2、DNA 合成的方向?(1)DNA 单链两端的命名①DNA 基本单位-脱氧核苷酸①DNA 基本单位-脱氧核苷酸脱氧核糖磷酸碱基 1号碳 1号碳 5号碳 5号碳 3号碳 3号碳 ATGC A TG C5 ,端(磷酸基团末端) 5 ,端(磷酸基团末端) 3 ,端(羟基末端) 3 ,端(羟基末端) 3 ,端 3 ,端 5 ,端 5 ,端(1)DNA 单链两端的命名(2)DNA 聚合酶的特性?DNA 聚合酶不能从头开始合成 DNA ,而只能从 3’端延伸 DNA 链。因此, DNA 复制需要引物。 DNA 的合成方向: 总是从子链的 5’端向 3’端延伸思考: DNA 复制的前提是什么? 体外扩增DNA 如何打开双链? 3、 DNA 分子的热变性原理—— PCR 仪原理 DNA 双链 DNA 单链变性(加热 80-100 ℃) 复性(缓慢冷却) 变性的目的: 解开双链思考:高温能使 DNA 解旋,但普通 DNA 聚合酶在高温下会失活, __________________ 找到耐高温 DNA 4、体外 DNA 复制的条件(PCR 反应的条件) ?①DNA 模板; ?②分别与两条模板链相结合的两种引物; ?③原料:四种脱氧核苷酸?④耐高温的 DNA 聚合酶; ?⑤控制温度,但不需解旋酶. ?同时 PCR 反应需要在一定的缓冲液中进行(维持反应液适宜的酸碱度)