文档介绍：7
常见提取总DNA, RNA
的方法与注意事项
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提RNA,可是电泳后什么条带都没有，用的是REDzol，是因为细胞
太少了还是别的什么原因，在加了***仿后没有出现3层，只有沉淀
和上清，是不是因为加***仿到离心隔的时间太久了？参考见解：
1、样品量太小；
2、操作时没有严格按照提RNA的要求做，一般需要带手套，最好带 上口罩，所有塑料用品需要用DEPC处理并高压，要在超净台上 操作， 尽量不让外源的RNA酶降解RNAo
3、RNA电泳的电泳液和胶必须现配现用，并且要用DEPC处理，电泳 槽、制胶板先用蒸馅水洗涤然后用75%的酒精处理，还有，要单独一
个槽子跑，不要和其他胶一起跑。跑胶时间控制在10分钟左 右。
4、在加了***仿后没有出现3层，只有沉淀和上清，可能是加的***仿 量不合适，一般是按***仿/mlTrizol加***仿的。从加***仿到离心隔的时 间对这个应该没有影响。
5、在提完RNA后可以测OD值，如果OD值在之间，说明提的RNA 比较纯。
RNA提取可不可以不用DEPC处理，多次灭菌（而不是长时间灭 菌） 也可以比较有效地灭活RNAse,这种方法确实可行吗？
参考见解：DEPC主要目的是防止RNA酶，其实还有很多其他的方法
处理器皿的，如***仿冲洗,NaOH处理，高温烘烤等另外两次灭菌也可以
代替DEPC处理•提RNA的关 费在于：防止内源性或外源性RNase降 解RNA—
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—对付外源性RNase有两种办法：能烤者烤，能泡者泡。
比起其他的核酸实验来说，就多这么一步。其二、RNase分子内部
存在二硫键，一般条件变性后很快即可复性，所以极为稳定；而且 其作用 条件“简单、快捷〃 一一与绝大多数DNase不同，不需要二价
阳离子即可迅速发挥酶切作用。所以，要想长期保存RNA标本，
DEPC处理溶液、Tip头等都是必不可少的。RNase一般高压不能灭 活，如
果不用DEPC的话，快速提取，快速使用，不能贮藏。
3 个关于乙醇单词：ethanol； alcohol； mercaptoethanol,他们的主
要区别是什么，可以互相代替吗？参考见解：ethanol是乙醇的专业名 词，是用在医学，工业等方面，主要是指工业酒精。alcohol也是乙醇，酒 精的意思，但是主要是用 在饮食行业的名词。mercaptoethanol是蔬基乙 醇，不同于前两种，是另外一种物质，是一种还原剂。
RNA提取中DNA是怎么去掉的在哪一步呢？
参考见解：在加入***仿离心吸取上清的时候，注意不要吸到中间层。一般
都要用DNase处理，即使吸不到中间层，也可能有DNA污染。
组织已经低温保存了一年多了，用来提RNA可以吗？
参考见解：液氮中保存应该可以，但如果是在• 70C低温冰箱中则可 能降
解，建议在液氮中保存时尽量将组织块切小，最好直径在1CM之内，有利
于保存并方便下一步RNA提取操作。当然如果条件允 许，可以将组织块
放入RNAIater后低温保存，只要普通冰箱即可，方便且效果很好。
提取血细胞的RNA,但血凝很快，应该注意什么问题是不是要加
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EDTA用什么方法会更好？
参考见解