文档介绍：蛋白质分子(fēnzǐ)基础4蛋白质制备
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蛋白质的电泳(diàn yǒnɡ)
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蛋白质的电泳分离
电泳分离的原理:
蛋白质是两性电解质,在一定的pH下,可以解离为带电荷的离子。在电场中可以电泳移动。
电泳迁移率：带电颗粒在溶液中迁移速度的快慢，用电泳迁移率(M)表示：
M为迁移率；dL为颗粒移动的距离；L为通电的时间。E为两个(liǎnɡ ɡè)电极之间的电势差。
M=
Et
dL
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影响(yǐngxiǎng)蛋白质电泳迁移率的因素
蛋白质分子的性质。
分子的电荷、大小和形状。
电场(diàn chǎng)
与电流和电压成正比。
缓冲液和离子强度
缓冲液离子强度增大，样品所带电荷降低，样品的泳动速度会减缓。
支持介质
纸的吸附作用最大，醋酸纤维素吸附作用较小。
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电泳(diàn yǒnɡ)的类型
自由界面电泳
使用支持物的区带电泳。
区带电泳是在半固相或胶状介质上加一个点或一薄层样品溶液，然后(ránhòu)加电场，分子在支持介质上或支持介质中迁移。支持介质的作用主要是为了防止机械干扰和由于温度变化以及大分子溶液的高密度而产生的对流。
区带电泳使用不同的支持介质，早期有滤纸、玻璃珠、淀粉粒、纤维素粉、海砂、海绵、聚氯乙烯树脂；以后有淀粉凝胶、琼脂凝胶、醋酸纤维素膜，现在则多用聚丙烯酰胺（PAGE）和琼脂糖凝胶。
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聚丙烯凝胶电泳
SDS-PAGE
凝胶等电聚焦(jùjiāo)
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SDS-PAGE电泳(diàn yǒnɡ)
：1(SDS:蛋白质)的SDS(十二烷基硫酸钠)。使所有蛋白质都带上负电。
SDS是阴离子去污剂，能与蛋白质的疏水部分结合，并且把大部分蛋白质拆成组成他的亚基形式。
在上样缓冲液中加入巯基乙醇，可以使二硫键还原为巯基。使不同(bù tónɡ)的蛋白质分子的短轴一致，长轴与蛋白质的分子量成正比。
SDS-PAG中，蛋白质电泳的速度不再取决于蛋白质的电荷与形状，只与蛋白质的分子量有关。
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SDS-PAGE电泳(diàn yǒnɡ)
当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：
logM=K-bX
M为分子量，X为迁移率，k、b均为常数(chángshù)，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
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SDS-PAGE电泳(diàn yǒnɡ)
绘制标准曲线：
按下式计算相对迁移率：
以每个蛋白标准的分子量对数对它的相对迁移率作图得标准曲线，量出未知蛋白的迁移率即可测出其分于量，这样的标难曲线只对同一块凝胶上的样品的分子量测定(cèdìng)才具有可靠性。
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SDS-PAGE电泳(diàn yǒnɡ)
PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同(xiānɡ tónɡ)，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。
不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。
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