文档介绍：Southern 印迹杂交实验报告
姓名：陆叶学号：**********专业：公共卫生
实验时间：； 带教老师：潘銮凤
【实验目的】
学****核酸杂交的基本过程和操作
【实验原理】
将待检测的DNA分子用或不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到***纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应，检测靶DN***段中是否存在与探针同源的序列。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。
用途：检测样品中的DNA及其含量，了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。
【实验步骤】
基因组DNA的限制性内切酶酶切
、10X酶缓冲液，酶，做好标记。老师给的HL60基因组DNA 10μg（）；10×Buffer E（）；EcoR I（10 u/μL）（2μL）。总体积20μL。 37℃。
2、1％琼脂糖电泳
先制备凝胶， gAgarose放入三角烧瓶中，加入60 mL TAE溶液，微波炉中加热令其完全溶解，稍作冷却后加入GelRed核酸染液 6μL（稀释10,000倍）。浇板，水平放置，待凝。胶凝后按照以下顺序加样。两组共用一块凝胶，共7个样。
基因组DNA10 20μl （自己的）
基因组DNA10 μg（老师的）
酶切样品
阳性对照（c-myc kb线性片段，30pg/μl, 10μl)
酶切样品
基因组DNA10 μg （老师的）
基因组DNA10 20μl （自己的）
插上电源，负极在样品槽一边，DNA将向阳极跑，80V电泳2小时左右，直到溴酚蓝染料跑到接近凝胶尾部，在电泳期间做好胶变性和转移准备。
3、变性
切胶，2—6孔，,长7cm(从顶部开始，可用尼龙膜保护纸作为标尺）
将凝胶浸在5倍体积的胶变性液中, 慢慢摇动20分钟。
ddH2O洗2次。
③在胶中和液中慢慢摇动15分钟。
4、转移
在搪瓷盘中加入300 ml 10×SSC，放上培养皿和小玻璃板。
将3张长滤纸浸湿，逐张放在玻璃板上，用移液管的滚动，赶走气泡。
切除多余凝胶，小心地将凝胶放在滤纸上（加样孔面向下），赶走滤纸与胶之间的气泡。
再将与胶大小相同的尼龙膜（浸湿）放在胶上，同样不能有气泡，然后放上三张浸湿的滤纸，赶走气泡。
紧贴凝胶四周各放一张X光片。
小心蒙上一张比搪瓷盘大的保鲜膜。保鲜膜要紧贴滤纸，但不能让滤纸移动。
用刀片在离滤纸周围约1-2 mm处，轻轻割断保鲜膜，但不能割破滤纸。取走滤纸上的保鲜膜。
整齐地放上草纸，数张草纸一折为二，草纸堆要高出搪瓷盘边约10 cm。
在草纸上放上玻璃板, 压上约500 g重的重物, 转移过夜。
5、固定
①将胶和尼龙膜一起翻过来,用铅笔深入加样槽在尼龙膜上画上槽的位置。
②正面朝上放在紫外交联仪中，交联固定。
6、杂交和洗膜
①将尼龙膜放入杂交管内, 加预杂交液, 68℃封闭6小时。②倒出预杂交液,