文档介绍：: .
各操作步骤试剂与缓冲液的配制
碱裂法提取质粒
1、 LB 培养基（配制1）
胰化蛋白胨 1%
酵母提取物 %
NaCI 1%
（）
方法：分别称取胰化蛋白胨10 g、酵母提取物5 g、NaCI 10 g,溶于950 ml 去离子水中，加热直至溶质全部溶解。用5 mol L・-1 NaOH（）。用去离子水定容至1 L。 M pa高温下蒸汽灭菌20 min。（若制备固体培养基定容前加入2%的琼脂，加热使其溶解，。再用去离子水定容至1L。 M pa高压下蒸汽灭菌20 min。）
2、碱裂解溶液I （配制100 ml）
葡萄糖 50 mmol/L
Tris-Cl（pH ） 25 mmol/L
EDTA （pH ） 10 mmol/L
方法：分别称取 g 葡萄糖、 g Tris、 g EDTA 置于 100 ml 的烧杯中，加入80 ml的蒸馏水使之溶解，用浓盐酸调中定容至100 ml。 M pa压力下灭菌15 min，装于棕色试剂瓶中保存于 4C。
3、碱裂解溶液U （配制100 ml）
mol/L NaOH
1% （m/V） SDS
方法： g NaOH、1 g SDS置于100 ml的烧杯中，加入80 ml 蒸馏水使之溶解，转入容量瓶中定容至 100 ml。装于棕色试剂瓶中，室温保存。
注：碱裂解溶液U要现用现配制，室温下使用
4、碱裂解溶液川（配制100 ml）
5 mol/L乙酸钾
冰乙酸
H2O
方法：用量筒分别量取
ml
ml
ml
5 mol/ ml [ 5 mol/L乙酸钾的配制（100
ml）: g乙酸钾置于100 ml的烧杯中，加入80 ml蒸馏水使之溶解, 转入容量瓶中定容至100 ml。、 ml冰乙酸于100 ml的容量瓶中，加蒸馏水定容至100 ml。装于棕色试剂瓶中保存于 4C。用时置于冰浴中。
5、STE溶液（配制10ml）
mol/L NaCl 10 mmol/L Tris-Cl（pH ）
1 mmol/L EDTA （pH ）
方法：分别称取 g NaCl、 g Tris、 g EDTA 置于 50 ml 的烧杯中加入5 ml的蒸馏水使之溶解，容至10 ml。装于棕色试剂瓶中，室温保存。
6、TE（pH ）缓冲液（配制 10ml）
100 mmol/L Tris-Cl（pH ）
10 mmol/L EDTA(pH )
方法： g Tris、 g EDTA于50 ml的烧杯中加入5 ml 的蒸馏水使之溶解， ml。分装后 M pa高压下蒸汽灭菌2