文档介绍：实验一斐林试剂置换法测定还原糖的含量一、实验原理糖类包括多糖、双糖和单糖,其中单糖和某些双糖具有游离的羰基,称为还原糖,多糖和蔗糖无还原性。利用糖的还原性,与斐林试剂(氧化剂)中的二价铜离子还原为一价铜,进行氧化还原反应,,再进行测定。斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂,反应的终点可用次***蓝作指示剂,在碱性、沸腾环境下还原呈无色。根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量,计算出样品还原糖量。二、试剂与材料 1、斐林试剂甲 CuSO 2O 1000ml 50ml/ 组乙 346 g 酒石酸钾钠+100gNaOH 1000 ml 50ml/ 组 2、1%次***蓝 1 g次***蓝+100 ml水/班棕色瓶保存 3、% 标准 G 2gG105 ℃烘干到恒重加水到 1000 ml 2000ml/ 班 4、碱式滴定管 5、样品溶液:待测 G液样品 1:稀释 20倍, 1000 ml / 班样品 2:稀释 50倍, 1000 ml / 班 6、电炉三、操作方法 1、斐林试剂标定 A 取甲液 5ml+乙液 5ml,( 注意:甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀,应将甲液加入乙液,使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶)置于 250 ml三角瓶中,加入 10ml水,并从滴定管中加入 % 的标准 G若干毫升(约 23ml)。(量控制在后滴定时消耗 - ml) B 电炉上加热至沸,并保持微沸 2分钟,加 2滴1%次***蓝溶液,趁沸以每两秒 1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液用 % 标准 G滴定至蓝色消失,有红棕色沉淀, 溶液清亮为终点止。记录耗用的 G量为 V 0, 必须在 1min 内完成。注意:还原的次***蓝易被空气中的氧氧化,恢复成原来的蓝色,所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态,并且避免滴定时间过长。 2、定糖预备试验同1法取斐林试剂,加 10ml样品液,摇匀于电炉上加热至沸, 保持微沸 2分钟,加 2滴1%次***蓝,用 % G滴定至蓝色消失。记录耗用的 G量为 V 13、样品中还原糖测定同上法吸取斐林试剂加 10ml样品液(预先稀释),补加( V 0—V 1)ml水,并从滴定管中预先加入( V 1-1)ml %G ,摇匀至电炉上加热至沸, 保持 2min 微沸,加入 2滴1%次***蓝,继续用 G滴定至蓝色消失。记录消耗的标准 G体积为 V毫升。四、结果计算还原糖含量(以G计) (g/ml) =(Vo-V) * *1/10 * n 式中 Vo-------- 斐林试剂标定值, ml V--------- 样品糖液测定值, ml ----- 标准 GS液浓度, g/ml 10-------- 样品糖液体积, ml n--------- 样品稀释倍数