文档介绍：: .
铁皮石斛组织培养方案报告
一、实验目的
了解铁皮石斛培养的方法和步骤，熟练掌握外植体的取材、消毒、接种、初代培养的操作过程。
二、实验器材
超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、长镊子、培养皿、酒精灯、接种工具、烧杯、玻璃棒、移液管、培养箱、剪刀、培养瓶等。
三、实验步骤
配方：
根据不同阶段，培养基配方有所差异。如表 1
表1各种培养基配方
不同阶段
H伞甘培养基
备注
愈伤组织（原球茎）的诱导
MS+L6-BA+3蔗糖 +%琼脂
pH=
原球茎的增殖
MS+20%铃薯+3%蔗糖+%琼脂
pH =
原球茎的分化
MS+20马铃薯+LNAA+3蔗糖+%琼
脂
pH=
幼株的生根壮苗
MS+10香蕉 +LNAA+3蔗糖 +%琼脂
pH=
配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例）
10%香蕉（w/w） +MS +3%蔗糖（w/w） +%琼脂（w/w） +L NAA
1）量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾；
2）准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸 5mi n，其间搅拌使之充分溶解；
3）按照大量、微量、卩£+盐、有机I、有机U顺序，量取 MS各种母液于盛有50ml蒸馏水的烧杯，混合均匀；
4）将2）和3）的溶液混合，然后加入 30g蔗糖，并移取2ml NAA （ml），混合均匀；
5）加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5min，其间不断搅拌使之充分溶解；
6）冷却至50± 5C时，调pH至一。分装于培养瓶内，瓶。注意事项：
① 溶解香蕉的蒸馏水尽可能多，以确保香蕉各种成分完全溶解；
② 各种母液混合时，要按照大量、微量、 F/盐、有机I、有机U的顺序；
③ 煮沸时，小心溶液溢出；
④ 分装时不要污染培养瓶瓶口。
灭菌：
1）检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表，确保灭菌锅各指标和功能的正常，以防事故发生；
2）把带灭菌的培养基装入锅内，盖上锅盖，对称而均匀地扭紧螺丝；
3）打开电源和排气阀，调节电压至 220V;
4）待排气阀排除水蒸气30s— 1min后，关闭排气阀；
5）当温度上升到121C后，调节电压至135V,保持20min；
6）关闭电源，使之自动降温至 0C。10min后，打开排气阀和锅盖；
7） 5— 10min后，取出培养基放于试验台上冷却，待用
表2灭菌时间统计
阶段
单锅火菌（耗时
64min）
多锅连续火菌
第一锅（耗时63min）
第二锅（耗时46min）
起始
22:21
8:04
9:30
排气
22:41
8:23
9:43
T=121C
22:50
8:32
9:50
关闭电源
23:10
8:52
10:10
气压降至0
23:25
9:07
10:16
注意事项：
① 启动灭菌前，应检查水位、电源、排气阀、安全阀、排气管等，确保正常；
② 灭菌锅底部应铺垫一层报纸，以防培养瓶机械破损；
③ 灭菌电压不宜