文档介绍：第二章菌种的保藏与复壮?菌种衰退的基本原因是变异, 变异是不可避免的,而减缓变异速度则是可能的。变异速度与菌种所处的环境有密切的关系,不良环境条件能促进变异,频繁或过多传代也是造成衰退变异的重要原因。为菌种创造良好条件,减缓菌种衰退, 这就是菌种保藏与复壮工作。第二章菌种的保藏与复壮?一、菌种保藏?二、菌种的提纯与复壮一、菌种保藏?工业微生物菌种保藏与其他目的的菌种保藏要求有所不同。工业微生物菌种保藏,是要使菌种生产能力和与生产工艺相适应的优良性状保持稳定,当然做不到绝对不变,只是力求把这种衰退现象推迟减缓到最低限度。菌种保藏?菌种保藏有许多的方法,其共同的目标是把菌株的优良性状保存下来,防止退化、死亡或杂菌污染。保藏的一般程序是选取优良的纯菌种,最好是用其分生孢子或芽孢等休眠体,在其休眠和停止生长的条件下保藏。微生物生长要求适宜的温度、水分、空气和营养物质等,如将菌种处于低温、干燥、无氧和缺乏营养的条件下,就可以使菌种暂时处于休眠状态。菌种保藏其中低温是保藏菌种的重要因素,也是常用的一种简单易行的方法。在作低温保藏时,注意尽量不损伤细胞。在缓慢冷冻时,胞外基质一般较快结冰而形成冰晶使基质浓度增高,造成细胞水分外渗而大量脱水,可能使细胞死亡。如快速降温,胞内也很快形成冰晶,胞内外渗透压基本平衡,同时胞内冰晶较小,对细胞及原生质膜的损伤也较小,菌株不易死亡,影响也较小。与低温相关的保藏方法,如冷冻干燥法、超低温保藏法等,都是利用低温条件下细胞与环境的特殊平衡原理而设计的。一、菌种保藏?(一)低温保藏法?(二)低温定期移植法?(三)石蜡油低温保藏法?(四)干燥保藏?(五)甘油管保藏法?(六)真空冷冻干燥法?(七)液氮超低温保存现行的菌种保藏方法有下列诸种:(一)低温保藏法?这是一种常用的简便方法。一般的斜面孢子、液态孢子、斜面种子以及用麸皮、大米、小米或碎玉米制成的孢子,可以放在 4℃冰箱内保藏,这种温度条件下不能使菌体进入休眠,而仅是抑制微生物的生命活动。因此,保藏时间不宜过长,一般不超过 1~2 个月为宜。本方法虽然简便,但由于菌株处于较高的水平活性下,这对保藏株的生产性状是不利的,因此,生产菌种一般不采用此法保藏。(二)低温定期移植法?把培养好的斜面菌种放在低温干燥处保存, 定期移植,一般 3~6 个月移植一次( 视菌种特征而定) 。也可以用穿刺培养,定期移植法保藏细菌,其效果也较好。穿刺培养是将含 %~ %的琼脂培养基装试管灭菌后直立冷凝后,用接种针尖挑取少量菌体,垂直刺入琼脂培养基中心,放在适当温度下培养,待菌长好后即可放低温保存, 此法较斜面保存有利,大肠杆菌可保藏 2年以上不发生明显变异。(二)低温定期移植法?斜面定期移植与穿刺移植法有其缺陷, 即容易发生遗传变异;连续传代可使一些生产性状丢失或减弱,也易于污染杂菌。因此,一些贵重菌株及生产优良菌株不宜用此法保藏。(三)石蜡油低温保藏法?本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖灭菌的液体石蜡,达到菌体与空气隔绝, 使菌处于生长和代谢停止状态,同时石蜡油还防止水分蒸发,在低温下达到较长期的保藏菌种的目的。保藏温度要求在-4~4℃下。液体石蜡法适用于不产孢子的菌种。