分析化学 高效液相色谱.ppt

文档介绍：分析化学 高效液相色谱
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3-1 概 述
HPLC是60年代在GC和经典液相色谱基础上发展起来的。
GC柱效高，且能分离、定量，但有些热稳定性差，不易挥发的组分不能用GC直接分析，人们想到模仿GC，用细颗粒固定相，薄壳固定液，以增加柱效。
模仿LC用液体作流动相，在室温下进行，但阻力太大，液体流动相难以通过，所以又想到加高压泵，加快流动相流速，这样即增加了柱效，又加快了分析速度，也拓宽了应用范围，把柱子、高压泵、检测器配成仪器，就形成高效液相色谱仪。
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HPLC与LC的比较
LC HPLC
柱径 1 ～ 2cm 2 ～ 5mm
颗粒 150 ～ 200µm 5 ～ 10 µm
压力 常压 高压
tR 1 ～ 20h 1h内
n 2 ～ 50 105 / 米
用途 初步分离 高效分离、高灵敏度定量
装置 非仪器化 精密仪器，
HPLC 优点： 柱效高
分析时间短
可定量
仪器分析
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HPLC与GC的比较
GC HPLC
流动相 g l
温度 高温 室温
组分 易挥发、热稳定性好 不受限制
可测有机物 20% 75%～80%
tR 1～30min 1～60min
灵敏度 10-12～10-14g/ml 10-9～10-11g
流出物 不易收集 易收集
HPLC 优点： 应用范围广，组分易回收
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GC与 HPLC选择：
小分子——热稳定性好——GC
大分子——热稳定性差——HPLC
tR 短
GC优点： g 廉价
灵敏度高
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二.   HPLC法的特点：
1. 高效分离 n =105 /米
2. 高速 使用高压泵，出峰时间几分钟到几十分钟
3. 高灵敏度 检测下限：10-9～10-13g（最小检测量）
4. 自动化程度高（仪器分析、电脑控制、色谱工作站）
5. 应用范围广 可测有机物75%～80%
一. HPLC法的分类
吸附色谱
l —s 离子交换色谱法
尺寸排阻色谱法
l — l 正向色谱
反向色谱
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二、高效液相色谱法的特点 feature of HPLC
特点：高压、高效、高速、高灵敏度
高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。
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分配系数 K=组分在固定相中的浓度 /组分在流动相中的浓度  =CS / CM分配系数的差异是所有色谱分离的实质性原因
3-2 影响分离的