〖医学〗目的基因的克隆PCR法扩增目的基因片断.ppt

文档介绍：目的基因的克隆— PCR法扩增目的基因片断
PCR(Polymerase Chain Reaction)，聚合酶链式反响,模拟了发生在细胞内的DNA复制的过程
DNA的结构〔1〕
三磷酸核糖核苷NTP
三磷酸脱氧核糖核苷dNTP
三磷酸双脱氧核糖核苷ddNTP
DNA的结构〔2〕
A腺嘌呤
G鸟嘌呤
C胞嘧啶
U尿嘧啶
T胸腺嘧啶
五种碱基
A-T C-G
DNA的结构〔3〕
氢键维持了DNA的双螺旋结构
DNA的复制〔1〕
3’-OH进攻5’- Pi
DNA聚合酶催化
DNA的延伸方向:5‘->3’
DNA的复制〔2〕
DNA复制相关蛋白
在复制起始点翻开
双链DNA
然后DNA解链酶
结合到单链DNA上
进一步解开双链DNA
DNA的复制〔3〕
DNA的复制 和 体外的模拟
模板〔母链〕 细胞内源 外源参加
翻开双链 解链酶 加热变性
维持单链 单链结合蛋白 高温
引物 引物合成酶 外源参加
底物dNTP 细胞内源 外源参加
聚合酶 细胞内源 外源参加
反响环境 细胞内环境 缓冲液
PCR循环--变性