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生物化学实验报告
姓 名: 学 号: 专业年级:
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称
(Title of
Experimetn)
血清清蛋白、y -
球蛋白的分离、提纯与鉴定
实验日期
(Date of
Experiment)
2013-12-11
实验地点
（Lab No.）
合作者
指导老师
(Partner)
(Instructor)
总分
(Total Score)
教师签名
(Signature)
批改日期
（Date）
?????
【实验报告第一部分（预****报告内容）：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、 主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）:
XX
实验目的：1、掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法
2掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法
3、 掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法
4、 掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法
5、 了解柱层析技术
实验原理：1、蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。
2、 不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。利用这些性质的差别， 可分离纯化各种蛋白质。
3、 盐析法：盐析法是在蛋白质溶液中，加入无机盐至一定浓度或达饱和状态，可 使蛋白质在水中溶解度降低，从而分离出来。蛋白质溶液中加入中性盐后，由 于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化膜减弱乃 至消失。中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷 大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，蛋白质分子之间聚集而沉淀。
4、 离子交换层析：离子交换层析是指流动相中的离子和固定相上的离子进行可逆 的交换，利用化合物的电荷性质及电荷量不同进行分离。
5、 醋酸纤维素薄膜电泳原理：血清中各种蛋白质的等电点不同，。 ，在电场中向正极移动。由于血清中 各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电
泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白离 Albumin）、a 1-球蛋白、a
2-球蛋白、B -球蛋白、丫 -球蛋白5条区带。
实验材料：
人混合血清 葡聚糖凝胶离G-25）层析柱
DEAE千维离子交换层析柱 饱和硫酸铵溶液
醋酸铵缓冲溶液 20% 磺基水杨酸
1%BaQ溶液 氨基黑染色液
漂洗液 巴比妥缓冲溶液
电泳仪、电泳槽
实验流程：
盐析（粗分离）一葡聚糖凝胶层析（脱盐）-DEAE千维素离子交换层析（纯化）-
醋酸纤维素薄膜电泳（纯度鉴定）
实验步骤:
（一）
盐析+凝胶柱层析除盐：
沉淀（含球蛋白）加水
，溶解室温放置 10min，4000上清液离含清蛋