文档介绍：吉林农业大学
硕士学位论文
大豆贮藏蛋白基因Gy5的克隆及植物表达载体构建
姓名:刘灵芝
申请学位级别:硕士
专业:作物遗传育种
指导教师:王丕武
20040601
摘要转入根癌农杆菌校霉才嘌ń獹导入烟草叶片,在已获得的再生植株本研究克隆了一个优良种子贮藏蛋白质基因,初步证实了所构建的植物转化栽体近年来,随着人民生活水平的提高以及对外贸易的开拓,作物营养品质研究日益引起人们的关注。利用基因工程技术改良作物营养品质的研究始于世纪年代,虽起步较晚,但通过近年的发展,现已取得了一些可喜的成就。作物品质改良主要集中在改良种子贮藏蛋白、淀粉、油脂的含量和组成上。近年来国内外许多实验室竞相展开种子蛋白质基因工程研究。由于人类生产的植物蛋白主要来源于禾谷类和豆类作物的种子,故种子蛋白质的改良极为重要。改变贮藏蛋白质一直是禾谷类作物品质改良基因工程的研究课题。大豆种子贮藏蛋白的含量远远高于其它作物,占种子干重的%以上,是人类食人体必需氨基酸,同时还具有抗肿瘤、预防心血管疾病、增强免疫功能等生理保健功能。具有极高的营养价值和经济价值。大豆贮藏蛋白中大部分是球蛋白,主要包括大豆球蛋白球蛋白涂谝话榇蠖骨虻鞍球蛋白球蛋白舍硫氨基酸含量远高于蛋白,其含量比值/苯佑跋齑蠖沟鞍子Q分始肮δ芴匦裕佣影响大豆蛋白的应用价值。利用基因工程技术,筛选优良的大豆蛋白虻鞍谆资源,将其转移到同种或异种植物中,以提高其种子蛋白质含量、改良蛋白质品质,本研究根据发表的大豆虻鞍譍的序列,应用生物软件设计了一对引物。用经过改良的异硫氰酸胍法提取大豆未成熟种子的总S肦ɡ┰龀瞿康钠危肊/盖泻笥雙载体连接,重组质粒用热激法转化大肠杆茵。穿刺培养的菌株送交宝生物工程有限公司测序,测序结果表明所扩增的片段符合预先设计,基因长度为,>基酸编码分析,有黾罨<娌⒆樱渌个碱基导致两个氨基酸有差异,氨基酸连接,构建了合有大豆贮藏蛋白基因闹参锉泶镌靥濉S梅锤炊橙诜ń柿T蕴中,经抗性选择和觳饣竦昧俗;仓辍能够将大豆种子贮藏蛋白基因叭胫参锾宀⒌玫奖泶铮=渥R频酵只蛞熘植物中,以提高其种子蛋白质含量和改善种子蛋白质品质的深入研究奠定了基础。物和动物养殖的主要植物蛋白来源。大豆蛋白氨基酸组分齐全,特剐是含有全部这在作物品质改良方面具有广阔的应用前景,为特殊蛋白质的生产开辟了道路。=ù似斡刖哂蠧启动予的表达载体吉林农业大学硕士学位论文大豆贮藏蛋白基因目寺〖爸参锉泶镌靥骞菇
..琌∞,,崛÷;经甲醛变性琼脂糖凝胶电此外,本研究对富含蛋白质、糖类等物质的组织或器官缰肿的崛》法进行了研究和改良。用改进后的方法所提取的罚贤夥止夤舛纫遣舛ǎ泳,可看到两条清晰的带,且前者带宽,说明挥薪到狻4搜芯刻岣了奶崛⌒屎椭柿浚⒘艘恢指咝崛的方法。、逑抵幸锱;逑抵凶罴岩锱ǘ任猯/;最佳退火温度为℃。,最后确定为℃,此时能扩增出专一的目的带。由此可以得出结论:在其它条件相同时,用逆转录产物做耐嘶鹞露鹊陀诔9瘸9鍼低孀笥摇关键词:大豆贮藏蛋白基因克隆载体构建遗传转化度、退火温度等几个方面进行了优化。确定在逆转录体系中最佳模板昧课进行二次保赡苁怯捎谔逑党煞值母谋洌谕嘶鹞露任媸背鱿址翘匾齑吉林农业大学硕士学位论文大豆贮藏蛋白基因目寺〖爸参锉泶镌靥骞菇
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