伪狂犬病毒pcr诊断.ppt

文档介绍：伪狂犬病毒PCR诊断
实验目的：
1、了解PCR反应的原理、方法及操作步骤；
2、掌握伪狂犬病毒PCR检测的方法；
实验内容：
1、讲述PCR反应的原理、方法及操作步骤，
让同学们观看PCR反应的动画；
2、伪狂犬病毒PCR检测。
2021/4/27
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什么是PCR？
聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。
一、PCR反应的原理、方法及操作步骤
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PCR及有关技术的发展历史（1）
1983 Cetus 公司的 K. Mullis在这年底（12月16日第一次成功实验）发明了PCR。
1985 关于PCR 的文章首次由Cetus公司Saiki等人在 Science 上 发 表 (R. Saiki, S. Scharf, F. Faloona, K. Mullis, G. Horn, H. Erlich and N. Arnheim)
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PCR及有关技术的发展历史（2）
1987 当年7月Cetus 公司在美国获得PCR基本技术专利批准。
成立于1985年底的Perkin-Elmer Cetus仪器公司 （ PECI ）于这一年的11月推出了第一 个PCR试剂产品及第一台热循环仪。
1989 Science 报道了耐热性DNA多聚酶 Taq 酶的 发现,预示着分子时代的到来。12月《Science》杂志将PCR和它所使用的聚合酶命名为第一个“年度分子”。
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PCR及有关技术的发展历史（3）
1992 年3月Cetus 公司获得Taq酶、热循环扩增仪等专利；
Kary Mullis 因PCR的发明获得诺贝尔化学奖。
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PCR及有关技术的发展历史（4）
九十年代中期PCR临床应用在国内全面展开
1998年 实时荧光PCR技术开始在中国较广泛的应用于临床检测
1999年 西方发达国家尝试将PCR应用于血液筛查
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PCR原理
PCR是一种选择性扩增DNA或RNA的方法， 其基本原理是依据体内细胞分裂中的DNA半保留复制机理，以及在体外DNA分子于不同温度下双链和单链可以互相转变的性质，人为地控制体外合成系统的温度，以促使双链DNA变成单链；单链DNA与人工合成的引物退火，以及在dNTP存在下，耐高温的DNA聚合酶使引物沿单链模板延伸成为双链DNA。高温变性，低温退火，适温延伸等３步反应循环进行，使目的DNA得以迅速扩增。
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PCR原理
PCR技术在模板DNA、dNTP、Mg2+、合适Buffer等条件下，用耐热的Taq聚合酶代替DNA聚合酶，用合成的DNA引物代替RNA引物，经过DNA变性、引物与模板结合（复性）和延伸3个步骤的反复循环 （2530次）过程，使目的DNA呈指数扩增 。
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（1）DNA模板的热变性
将待扩增DNA加热到940C左右，使双链DNA解开成为单链，并游离于反应体系中作为模板。
（2）模板与引物的结合（退火或复性）
将体系温度降至合适温度（520C左右），使加入的引物与模板DNA两端（3ˊ端）碱基序列互补结合。
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