文档介绍：XXX
本科毕业设计(论文)答辩表
论文题目: 粗毛栓菌漆酶的分离与纯化
生命科学系系生物科学专业 06 级本科二班
学号 XXX
姓名 XXX
指导教师 XXX
评阅成绩
答辩委员会主席
答辩委员会委员
答辩成绩
XXX教务处印制
2010 年 6 月 2日
XXX本科毕业设计(论文)答辩记录表
答辩时间:2010年 6 月 2 日
记录人签字:
问1:如何计算得到漆酶的纯化度和回收率?
答: 一个典型的酶纯化过程常包括多个单元操作,各单元操作如何串联,
需靠实践探索,每经过一个步骤,一般可提高酶纯度2-3倍,总纯度可提高数千倍,而回收率常仅百分之几或十几。该实验中:回收率= U1/U2(U1:层析前总酶活力;U2:层析后收集酶的总酶活力),纯化度=N1/N2 (N1:层析前的比活力;N2:层析后的比活力)。
问2:你在盐析沉淀含漆酶的原酶时所用硫酸铵的饱和度是多少?
答:用75%硫酸铵饱和度对酶液进行盐析。确定该浓度需要设置10%、20%、30%、40%、50%、60%、65%、70%、75%、80%的饱和度梯度分别对浸提的酶液盐析,并测定上清液中漆酶酶活,发现75%饱和度时,盐析得到的沉淀中漆酶活性最高。所以要用75%的硫酸铵饱和度对漆酶进行盐析沉淀。
问3:裝柱的注意事项有哪些?
答:本次漆酶的分离与纯化试验使用的是阴离子交换剂Q- Sepharose Fast-Flow。层析柱填装时要先关闭出口,用溶剂灌到1/3体积,防止气泡产生,而且为避免分层,最好一次装完;裝柱完毕后要在柱上部添加少量溶剂,防止层析介质表层暴露到空气中;上样前层析介质要用溶剂平衡。
论文答辩评语:
该生介绍了论文的主要目的、内容与结果,能够正确回答有关提问。该生具备了一定的独立从事科学研究的能力。该论文达到了学士学位论文的要求。
答辩委员会主席签名:
XXX本科生毕业设计开题报告
毕业论文题目
粗毛栓菌漆酶的分离与纯化
题目类型
实验
题目来源
指导教师拟定
院(系)
生命科学系
专业
生物科学
指导教师
XXX
职称
教授
姓名
XXX
年级
06级
学号
XXX
一、立题依据(国内外研究进展或选题背景、研究意义等)
漆酶(ase, EC )是一种含铜离子的多酚氧化酶,最早发现于日本紫胶漆树
Rhus vernicifera 的浸出液中,现已证实一些高等真菌(主要是白腐真菌)也能分泌漆酶。白腐真菌是生物圈中木质素、纤维素和半纤维素的重要降解者,其分泌的漆酶在木质素降解过程中起着重要作用。漆酶可与多种底物作用,在有机合成、生物检测、免疫检测、有毒化合物的消除、生物传感器制作、制浆造纸废水处理、纸浆生物漂白和饮料加工、食用菌生产、食品分子交联、植物食品保护等方面具有广阔的应用前景和潜在应用价值。多年来,已对漆酶及其产生菌进行了广泛研究,内容涉及菌株生长特性、漆酶的合成调控、酶的分离纯化和酶学性质等多个方面。现已有近百种不同来源的漆酶被分离纯化并进行了酶学性质研究,一些漆酶基因已被克隆测序,有的还在酵母等真核生物内实现异源表达,但选育新的漆酶产生菌,优化其产酶条件仍是提高漆酶产量的一条重要途径和今后一段时期内研究的热点。
本研究所用粗毛栓菌Tr