文档介绍：核酸检测及相关技术
基本技术：核酸提取（DNA/RNA）、鉴定、PCR (RT-PCR/REAL-TIME PCR)、琼脂糖电泳
：基因克隆、转化；SSCP、RELF、杂交（southern/northern、原位杂交）、芯片检测
内容
一、基本技术
（一）核酸提取

（二）PCR扩增

(三)核酸、PCR产物的鉴定

二、相关技术
三、分子平台使用流程及仪器设备操作规范
精品资料
你怎么称呼老师？
如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是否会认为老师的教学方法需要改进？
你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？
教师的教鞭
“不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
“太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
（一）核酸提取
提取DNA目的：
主要是对基因和基因组进行分析。
提取RNA目的：
主要是对基因表达进行分析。
基因组DNA提取基本步骤
材料准备
破碎、裂解细胞
核酸分离和纯化
沉淀或吸附核酸，去除杂质
核酸溶解在适量缓冲液或水中
组织
培养的细胞
细菌
外周血
（一）基因组DNA提取
组织－－匀浆或液氮研磨
培养细胞－－蛋白酶K
外周血- - 裂解液
细菌- -裂解液
***仿或吸附柱
异丙醇、吸附柱
70％的乙醇洗涤
蛋白质的去除
盐离子的去除
1、材料准备
基因组DNA
来源：组织/培养的细胞/外周血
最好使用新鲜样本，低温保存的样品不要反复冻融
提取外周血DNA时，要选择有核细胞（单个核细胞）
培养的细胞培养时间不能过长，否则会造成核酸降解
含病毒的标本DNA含量较少，提取前先富集
（一）基因组DNA提取
取组织块 -，，转移到匀浆器中匀浆。
ml离心管中。
加20% SDS 25 μl，蛋白酶K(2 mg/ml)25 μl，混匀。
60 ℃ 水浴1-3 h。
蛋白酶K使多种蛋白质水解，并且蛋白酶K可在SDS存在下有活性。
a 匀浆法
TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护作用,不易破坏其完整性或产生开环及断裂。
SDS能使DNA和蛋白质分开。
b 液氮研磨法
组织标本的处理：
（一）基因组DNA提取
2、破碎裂解细胞
液氮研磨组织注意事项
确定起始样品量，在研磨前称量好。
研磨过程中要及时添加液氮，边研磨边添加。
可以将研钵放在大小合适的泡沫盒里面研磨，这样可以保温，减小液氮挥发的速度。
研磨成粉末，在液氮挥发尽，应立即加入裂解溶液（裂解溶液一定要含有抗氧化剂，防止DNA被氧化降解。常用的抗氧化剂有PVP，β-巯基乙醇等）。
裂解液加入后继续研磨，直至标本融化成液态。
b 液氮研磨法
培养细胞处理：
将培养细胞悬浮后，用PBS洗涤一次。
离心4000 g，5min，去除上清液。
加10倍体积的裂解缓冲液。
50-55℃水浴1-2 h。
要散细吹胞团块，使细胞被充分裂
（一）基因组DNA提取
破碎裂解细胞