文档介绍：研究生分子医学实验技能实验二
操作流程
琼脂糖凝胶板的制备
质粒DNA及酶切产物电泳（约1h）
（10 μl）酶切操作、保温（1-3h）
质粒DNA提取原理与方法、实验操作
纯化的质粒DNA（20μl）
琼脂糖凝胶电泳结果观察
结果分析与问题讨论
9月23日
9月30日
DNA的紫外分光光度法定量测定
实验三：DNA的琼脂糖凝胶电泳
实验四：DNA的紫外分光光度法定量测定
实验三
DNA的琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳法
凝胶电泳是分离和纯化DN***段最常用的技术。根据制备凝胶的材料:
琼脂糖电泳
凝胶
电泳
聚丙烯酰***电泳
一、琼脂糖凝胶电泳的功用
琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DN***段的标准方法。该技术操作简便快速，可以分辨用其它方法（如密度梯度离心法）所无法分离的DN***段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium bromide, EB)染色,在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确定DN***段在凝胶中的位置。此外,还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNA条带,用于以后的克隆操作。
二、实验原理：
在 pH 值为 ～ 时，核酸分***基几乎不解离，磷酸全部解离，核酸分子带负电，在电泳时向正极移动。采用适当浓度的凝胶介质作为电泳支持物，在分子筛的作用下，使分子大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大的差异，从而达到分离核酸片段检测其大小的目的。核酸分子中嵌入荧光染料（如 EB ）后，在紫外灯下可观察到核酸片段所在的位置。
三、琼脂糖电泳分离DNA的范围
琼脂糖可以形成各种形状、大小的孔隙度。琼脂糖凝胶分离DN***度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DN***段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳。
胶浓（%）
溴酚蓝
二甲苯青
1kb
1
2kb
2
四、电泳指示剂：
核酸电泳常用的指示剂有两种，溴酚蓝（ bromophenol blue, Bb ）呈蓝紫色；二甲苯晴（ xylene cyanol, Xc ）呈蓝色，它携带的电荷量比溴酚蓝少，在凝胶中的迁移率比溴酚蓝慢。
五、影响凝胶电泳的因素
在电场中,在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移,其迁移速率由下列多种因素决定: 1、 DNA的分子大小: 线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比。 2、 琼脂糖浓度 一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。