文档介绍：./department/biochemistry 实验八: 实验八: 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳贾跃腾贾跃腾罗世翔罗世翔 ./department/biochemistry 实验八: 实验八: 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳贾跃腾贾跃腾罗世翔罗世翔 ./department/biochemistry 一、一、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳实验操作及注意事项实验操作及注意事项( (P138 P138 ) ) ./department/biochemistry 实验分组(每人做一管,每组配一份胶) 认清试剂(试剂和吸管对号、量器的使用) 封管分离胶配制与灌胶(浓度为 6%,化学聚合, A1C2H2G5 ,每组总体积为 10ml ,灌胶高度为 7-8cm ) 封正丁醇 3mm (手法、高度、 15min 左右出现折光线时可进行下一步操作) 分离胶的配制 ./department/biochemistry 注意事项: 注意事项: 1 1、封管要严,防止漏液。、封管要严,防止漏液。 2 2、固定玻璃管要竖直,防止夹碎。、固定玻璃管要竖直,防止夹碎。 3 3、每组配一份胶,试剂与移液管对号,准确加量。、每组配一份胶,试剂与移液管对号,准确加量。 4 4、配胶后立即灌胶、配胶后立即灌胶( (用滴管灌胶,用后立即清洗用滴管灌胶,用后立即清洗) ) 5 5、正丁醇沿管壁缓缓加入、正丁醇沿管壁缓缓加入 ./department/biochemistry 浓缩胶配制(浓度为浓缩胶配制(浓度为 3% 3%,光聚合, ,光聚合, B1D2E1F4 B1D2E1F4 ,每组总,每组总体积为体积为 8ml 8ml ) ) 倒掉正丁醇倒掉正丁醇灌浓缩胶(灌胶高度为灌浓缩胶(灌胶高度为 , , 上面留上面留 1cm 1cm 空隙加样) 空隙加样) 封正丁醇封正丁醇 3mm 3mm (观察界面, (观察界面, 10 10分钟左右出现折光线时可分钟左右出现折光线时可倒去正丁醇) 倒去正丁醇) 浓缩胶的配制 ./department/biochemistry 注意事项: 注意事项: 1 1、倒掉正丁醇,用滤纸吸干再灌浓缩胶。、倒掉正丁醇,用滤纸吸干再灌浓缩胶。 2 2、配胶后立即灌胶( 、配胶后立即灌胶( 用滴管用滴管) ) 3 3、灌胶后立即清洗滴管,防止胶凝固于管中。、灌胶后立即清洗滴管,防止胶凝固于管中。 4 4、、撕掉封口膜撕掉封口膜,用胶塞将玻璃管固定于电泳槽上,用胶塞将玻璃管固定于电泳槽上( (竖直,防漏竖直,防漏) ) 5 5、加电极缓冲液( 、加电极缓冲液( 注意液面注意液面) ) ./department/biochemistry 安装电泳槽(结构、原理、电流及电极的方向、安装电泳槽(结构、原理、电流及电极的方向、不漏水、除气泡) 不漏水、除气泡) 加加buffer buffer (没过上下管口) (没过上下管口) 样品处理并加样( 样品处理并加样( 20ul 20ul ) ) 电泳( 电泳( 6mA/ 6mA/ 管,距底管,距底 1cm 1cm 时停止) 时停止) 剥胶剥胶固定(时间固定(时间 5min 5min ) ) 染色(时间染色(时间 2min 2min ) ) 漂洗脱色至背景透亮漂洗脱色至背景透亮 安装、加样、电泳 ./department/biochemistry ./department/biochemistry 二、电泳基本原理及相关知识二、电泳基本原理及相关知识