文档介绍：./department/biochemistry 实验八: 实验八: 不连续聚丙烯酰***凝胶电泳不连续聚丙烯酰***凝胶电泳贾跃腾贾跃腾罗世翔罗世翔 ./department/biochemistry 实验八: 实验八: 不连续聚丙烯酰***凝胶电泳不连续聚丙烯酰***凝胶电泳贾跃腾贾跃腾罗世翔罗世翔 ./department/biochemistry 一、一、不连续聚丙烯酰***凝胶电泳不连续聚丙烯酰***凝胶电泳实验操作及注意事项实验操作及注意事项( (P138 P138 ) ) ./department/biochemistry 实验分组(每人做一管,每组配一份胶) 认清试剂(试剂和吸管对号、量器的使用) 封管分离胶配制与灌胶(浓度为 6%,化学聚合, A1C2H2G5 ,每组总体积为 10ml ,灌胶高度为 7-8cm ) 封正丁醇 3mm (手法、高度、 15min 左右出现折光线时可进行下一步操作) 分离胶的配制 ./department/biochemistry 注意事项: 注意事项: 1 1、封管要严,防止漏液。、封管要严,防止漏液。 2 2、固定玻璃管要竖直,防止夹碎。、固定玻璃管要竖直,防止夹碎。 3 3、每组配一份胶,试剂与移液管对号,准确加量。、每组配一份胶,试剂与移液管对号,准确加量。 4 4、配胶后立即灌胶、配胶后立即灌胶( (用滴管灌胶,用后立即清洗用滴管灌胶,用后立即清洗) ) 5 5、正丁醇沿管壁缓缓加入、正丁醇沿管壁缓缓加入 ./department/biochemistry 浓缩胶配制(浓度为浓缩胶配制(浓度为 3% 3%,光聚合, ,光聚合, B1D2E1F4 B1D2E1F4 ,每组总,每组总体积为体积为 8ml 8ml ) ) 倒掉正丁醇倒掉正丁醇灌浓缩胶(灌胶高度为灌浓缩胶(灌胶高度为 , , 上面留上面留 1cm 1cm 空隙加样) 空隙加样) 封正丁醇封正丁醇 3mm 3mm (观察界面, (观察界面, 10 10分钟左右出现折光线时可分钟左右出现折光线时可倒去正丁醇) 倒去正丁醇) 浓缩胶的配制 ./department/biochemistry 注意事项: 注意事项: 1 1、倒掉正丁醇,用滤纸吸干再灌浓缩胶。、倒掉正丁醇,用滤纸吸干再灌浓缩胶。 2 2、配胶后立即灌胶( 、配胶后立即灌胶( 用滴管用滴管) ) 3 3、灌胶后立即清洗滴管,防止胶凝固于管中。、灌胶后立即清洗滴管,防止胶凝固于管中。 4 4、、撕掉封口膜撕掉封口膜,用胶塞将玻璃管固定于电泳槽上,用胶塞将玻璃管固定于电泳槽上( (竖直,防漏竖直,防漏) ) 5 5、加电极缓冲液( 、加电极缓冲液( 注意液面注意液面) ) ./department/biochemistry 安装电泳槽(结构、原理、电流及电极的方向、安装电泳槽(结构、原理、电流及电极的方向、不漏水、除气泡) 不漏水、除气泡) 加加buffer buffer (没过上下管口) (没过上下管口) 样品处理并加样( 样品处理并加样( 20ul 20ul ) ) 电泳( 电泳( 6mA/ 6mA/ 管,距底管,距底 1cm 1cm 时停止) 时停止) 剥胶剥胶固定(时间固定(时间 5min 5min ) ) 染色(时间染色(时间 2min 2min ) ) 漂洗脱色至背景透亮漂洗脱色至背景透亮 安装、加样、电泳 ./department/biochemistry ./department/biochemistry 二、电泳基本原理及相关知识二、电泳基本原理及相关知识