文档介绍：实验二 温度、pH值、激活剂和抑制剂对酶活性的影响 及特异性
一、实验目的
1．通过实验，观察温度、pH值、激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响。
2．能运用所学的生化知识对实验结果进行正确的分析。
二、实验原理
利用淀粉及其水解产物的颜色反应，来比较唾液淀粉酶在不同条件下催化淀粉水解的程度，从而判断温度、pH、激动剂和抑制剂对酶的活性影响。
淀粉
糊精
麦芽糖和葡萄糖
蓝色
碘
紫色→红色→无色
无色
碘
碘
＋
＋
＋
↓
↓
↓
二、实验原理
在低温时，酶活性降低，酶促反应速度较慢，甚至停止；随着温度升高，酶的活性恢复，反应速度加快；当达到最适温度时，酶的活性最大，酶促反应速度达到最大。人体内大多数的酶的最适温度在37℃左右。温度过高，酶变性失活，酶促反应速度下降，甚至停止。
每种酶都有最适的pH值，在最适pH值时，酶的活性最大，酶促反应速度最快；偏离酶的最适pH均可引起酶蛋白变性而降低或失去活性。唾液淀粉酶的最适pH值为。
***离子对唾液淀粉酶有激活作用；铜离子对唾液淀粉酶有抑制作用。
三、实验材料
%淀粉溶液 取可溶性淀粉1g, 加5ml蒸馏水, 调成糊状, 再加80ml蒸馏水, 加热并不断搅拌, 使其充分溶解, 放冷, 最后用蒸馏水稀释至100ml。
缓冲液 取溶液205ml，柠檬酸溶液795ml, 混合即成.
缓冲液 取溶液772ml，柠檬酸溶液228ml, 混合即成.
缓冲液 取溶液972ml，柠檬酸溶液28ml混合即成.
%NaCl溶液
% CuSO4溶液
【注意事项】
，避免杂质影响反应结果
，保证一致。
四、实验方法
稀释唾液制备 用水漱口，含蒸馏水咀嚼2分钟后，把唾液吐进烧杯中备用。（注：唾液淀粉酶活性具有个体差异，按下述各实验方法进行实验，有部分同学可能失败，可重新操作，但在重做过程中，要根据第一次实验结果改变稀释唾液的用量，反应太慢，则增加稀释唾液用量，如果反应太快，则减少稀释唾液的用量）
煮沸唾液的制备 取上述唾液约5ml，放入沸水中煮沸5分钟，取出备用。
（一）温度对酶促反应速度的影响
管 号
1
2
3
缓冲液（）
20滴
20滴
20滴
1%淀粉溶液
10滴
10滴
10滴
把三支管溶液摇匀，然后分别放至相应的温度中水浴预温
预温温度
0℃
37℃
37℃
预温5分钟后取出，继续向各管加入相应唾液
稀释唾液
10滴
10滴
—
煮沸唾液
—
—
10滴
把三支管摇匀，然后分别放至相应的温度中水浴10分钟，加碘2滴
水浴温度
0℃
37℃
37℃
结果与分析
取白瓷板一块，向各凹分别加1滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从2号管取溶液1滴，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘液1滴，摇匀观察颜色变化(切记勿摇动)。摇匀再观察。