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Top10大肠杆菌菌株使用说明.doc

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Top10大肠杆菌菌株使用说明.doc

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文档介绍

文档介绍:ToplO大肠杆菌菌株
编号
名称
北京华越洋生物NRR00710
ToplO大肠杆菌菌株
基本信息:
名称:ToplO大肠杆菌菌株 规格:300ul甘油菌 储存温度:-80°C
基因组:
F-mcrAA(mrr-hsdRMS-mcrBC)<p801acZAM15AlacX74recAlaraA139A(
ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endAl nupG 简介:
TOPIO菌株来源于MC1061菌株,
是目前实验室最常用的感受态细
胞之一,基因型与DH10B高度类似(DH10B为galE15型,而TOP10为 galU型)。TOP10生长速度快(比DH5a快,但比Machl-Tl生长速度慢), 10小时可见克隆,recAl和endAl的突变有利于插入DNA的稳定和高纯
度质粒DNA的提取。可用于构建克隆,蓝白斑筛选等实验,具有链霉素抗
性。
操作说明:
1,本品包含一份甘油菌,使用本甘油菌时可以不用完全融解,在甘油菌表 面躍取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用,但随着冻融次数 的増加,细菌的活力会逐渐下降。
2,为保证菌种纯正,避免其它细菌污染,尽最先划平板,然后再挑单克隆 菌落进行后续操作。
冷冻管开封:
用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌株复溶:
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖,吸取1ml左右复溶液,加入到冷冻 管中。轻轻振荡,使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌株复壮:
用无菌吸管吸取菌悬液,转移到复溶液滴瓶中。做好标识,在适宜温度下培 养。细菌在30-35°C培养箱中培养24-48h,真菌在23-28°C培养箱中培养24-72h (必要时,可适当延长培养时间)。
菌株传代:
将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中(尽量 增大接种最:如用无菌吸管吸取M50M新鲜培养物至固体培养基,边移动边缓 慢释放),适宜温度下培养,用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。
注意事项:
1、菌种活化前,将冷冻管保存在低温、