文档介绍：实验三 蛋白质的性质实验
第一页，课件共13页
实验目的
（氨基酸）
和主要连接方式（肽键）
第二页，课件共13页
# 双缩脲反应
1）原理：
将尿素加热到180℃，则两分子尿素缩合而成一分
子双缩脲，并放出一分子氨。双缩脲在碱性溶液中能
与硫酸铜反应产生红紫色络合物，此反应称双缩脲反
应。（蛋白质分子中含有许多和双缩脲结构相似的肽
键，因此也能起双缩脲反应，形成红紫色络合物。通
常可用此反应来定性鉴定蛋白质，也可根据反应产生
的颜色在540nm处比色，定量测定蛋白质）。
第三页，课件共13页
# 双缩脲反应
2）试剂：
（1）尿素
（2）10%氢氧化钠溶液
（3）1%硫酸铜溶液
（4）2%卵清蛋白溶液
2%卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液（蛋清：水=1：9）
第四页，课件共13页
# 双缩脲反应
3）操作：
取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使
尿素熔化，然后停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。
冷后，加10%氢氧化化钠溶液10滴，振荡混匀，再加1%
硫酸铜溶液2滴，再振荡。观察出现的粉红颜色。要避
免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖
粉红色。
向另一试管加卵清蛋白溶液约5滴和10%氢氧化钠溶
液约10滴，摇匀，再加1%硫酸铜溶液2滴，随加随摇。
观察紫玫瑰色的出现。
第五页，课件共13页
# 双缩脲反应
4）注意事项：
含有一个肽键和一个-CS-NH2,-CH2-NH2，-CRH-NH2
等基团的物质以及乙二酰二***等物质也有此反应。因
此，一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但
有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
第六页，课件共13页
# 茚三***反应
1）原理：
在加热条件下，所有氨基酸及具有游离α-氨基的
肽与茚三***反应都产生蓝紫色物质，只有脯氨酸和羟脯
氨酸与茚三***反应产生黄色物质。此反应十分灵敏，根
据反应所生成的蓝紫色的深浅，进行比色就可测定样品
中氨基酸的含量，也可以在分离氨基酸时作为显色剂对
氨基酸进行定性或定量分析。
第七页，课件共13页
# 茚三***反应
2）试剂：
（1）2%卵清蛋白
（2）%甘氨酸溶液
（3）%茚三***-乙醇溶液
第八页，课件共13页
# 茚三***反应
3）操作：
（1）取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液5
滴，%茚三***水溶液，混匀，在沸水浴中
加热1-2分钟，观察颜色由粉色变紫色再变蓝。
（2）%缬氨酸溶液，风干
后，%茚三***乙醇溶液，在微火旁
烘干显色，观察紫红色斑点的出现。
第九页，课件共13页
# 茚三***反应
4）注意事项：
β―丙氨酸、氨和许多一级***都呈正反应。因
此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三***反应，但能与茚
三***呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。在定
性、定量测定中，应严防干扰物存在。
此反应的适宜pH为5-7，同一浓度的蛋白质或氨基
酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至
不显色。
第十页，课件共13页