基因工程及其应用学习PPT教案.pptx

文档介绍：基因的剪刀——限制性内切酶（简称限制酶）
（一）基因操作的工具
限制酶是在生物体(主要是微生物)内的一种酶，能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性内切酶。
特点：特异性。
即一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。
大肠杆菌()的一种叫做EcoRⅠ的限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。
限制酶
限制酶
被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，它们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。
　　被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端？
基因的针线：DNA连接酶
基因的针线——DNA连接酶
DNA连接酶可把脱氧核糖和磷酸交替连接的DNA骨架上的缺口“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。
磷酸二酯键
将外源基因送入受体细胞，还需要专门的运输工具。这就是运载体。
基因的运输工具——运载体
常用的运载体主要有两类：
1）细菌细胞质中的质粒
2）噬菌体或某些动植物病毒
质粒是细胞染色体外能够进行自主复制的很小的环状DNA分子，存在于许多细菌以及酵母菌等生物中。有的细菌中只有一个，有的细菌中有多个。
质粒是基因工程最常用的运载体。
最常用的质粒是大肠杆菌的质粒，其中常含有抗菌素抗性基因。
标记基因，便于进行检测。
（二）基因操作的基本步骤
1）提取目的基因
2）目的基因与运载体结合
3）将目的基因导入受体细胞
4）目的基因的检测和表达