文档介绍：硕士学位论文分类号——密级——毛囊干细胞向角膜上皮细胞分化的初步研究余瑾堑三至垦垄堂±旦二迥晡逶学号教授指导教师杨恬第三军医大学细胞生物教研室,申请学位级别医学硕士专业名称细胞生物学论文提交日期年论文答辩日期学位授予单位和日期答辩委员会主席评阅人
指导教师签名:盔丛厶:逍金丝日期:巡:妄:第三军医大学研究生学位论文独创性声明第三军医大学研究生学位论文版权使用授权书迎骸坦论文作者签名:期:阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容C苣谌莩,可秉承学校严谨的校风和科研作风,本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。本人完全了解第三军医大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第三军医大学。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为第三军医大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查以采用影印、缩印或其他手段保存论文。日
英文缩写一览表英文缩写英文全称—中文全称牛脑垂体提取物同一分化抗原克隆形成率一二氨基联苯胺二甲亚砜细胞外基质乙二胺四乙酸表皮生长因子毛囊干细胞表皮增殖单位异硫氰酸荧光素胎牛血清免疫细胞化学免疫组织化学胰岛素样生长因子苏木精和伊红角质形成细胞无血清培养基角蛋白标记保留细胞磷酸盐缓冲液过渡放大细胞四甲基罗丹明终末分化细胞第三军医大学硕士学位论文狥—一猯
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毛囊干细胞向角膜上皮细胞分化的初步研究摘要难芯咳〉昧酥卮蠼梗壕晌I蒲Я煊蜓芯康娜鹊阒弧R话闳衔#上赴异性标志物的检测呈阳性表达。细胞移植经常出现免疫排斥。为此,我们试图寻找新的角膜上皮的再生来源。化方向。角膜基质是角膜缘干细胞的微环境,具有维持角膜缘干细胞特性的作用。实验采用免疫组化技术,检测大鼠毛囊赴上赴砻姹曛疚锖头只曛疚锏表达情况,运用显微分离及酶消化法分离并培养大鼠毛囊赴鄄炫嘌拿随着细胞生物学、分子生物学等生命学科的飞速发展和应用,近年来干细胞是指具有自我更新&力和向多种细胞分化猟瓻力的细胞。根据其发育阶段,干细胞分为胚胎干细胞和成体干细胞。毛囊是皮肤的重要附属器官,具有周期性生长的特点。目前研究发现毛囊的隆突区敲腋上赴主要栖息地,而且毛囊隆突细胞具有多向分化的能力,它不仅能够分化形成毛囊,还能够形成皮脂腺和表皮角朊细胞。尽管毛囊干细胞的研究取得了一定的进展,但是对其体外的分离、培养报道不多,这不仅限制了对它的生物学特性的研究,同时也制约了对其分化能力和调控机制的研究。我们采用显微分离与消化法结合分离出毛囊隆突区细胞,并采用不同的培养方法培养,得到具有高增殖潜能和低分化特征的毛囊干细胞,经干细胞特‘角膜上皮的完整对维持角膜正常的生理功能至关重要,多种致病因素可造成角膜上皮的缺损、,新生血管长入,结果导致假性胬肉形成,角膜缘缺失,解决这些问,.题就要求重建角膜上皮。角膜缘干细胞是角膜再生的来源,但是在许多病理情况下,角膜上皮的缺损已经大大超出了机体自身角膜缘干细胞的补充能力,而同种异体角膜缘干目前的研究证明,成体干细胞具有多向分化能力,干细胞所处的微环境决定了其分发现,角膜基质中的角膜基质细胞细胞分泌的细胞因子有利于角膜缘干细胞的增殖,并且角膜基质细胞可以调节角膜上皮的功能。研究发现一定的条件下,角膜上皮基底细胞可以分化为表皮细胞。本实验以大鼠角膜基质作为诱导环境,在嘌逑抵校将毛囊赴虢悄せ氏赴泄才嘌ㄏ蛴盏挤只螅鄄旖悄ど掀ぬ异的标志物谋泶锴榭觥V饕=峁缦拢⒚仪赴呐嘌凹第三军医大学硕士学位论文’
双标方法检测细胞籭虲谋泶铮酶上赴勘泶颿一,而表达较弱。传代后及随着培养时间的延长,细胞的虰纤匮粜员泶镏鸾ゼ跞酰显微分离并培养角膜缘基质细胞,然后将角膜缘基质细胞培养于胶原中,模拟在体⒚腋上赴奶逋庥盏挤只毛囊干细胞的生长和分化情况。结果发现:趖共培养旌螅褺细胞赴又值饺荷弦子谔冢赴士寺⌒陨ぁK孀攀奔溲映ぃ赴鸾シ长,随着培养时间的延长逐渐分化分层,部分细胞出现拉网现象,光镜下观察与体外培养干细胞体外生长特性。结果发现:上赴砻姹曛疚颣、整联蛋白的表达主要位于毛囊的们槐泶锩疑掀さ南赴只曛綤。晕⒎掷爰懊赶