文档介绍：实验二淀粉酶活性测定实验报告
实验二淀粉酶活性测定实验报告
实验二淀粉酶活性测定实验报告
淀粉酶活性的测定
一、实验目的
酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的基础。酶活力由酶活力单位表征， 通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到。
淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称。α - 淀粉酶是一种典型的内切型淀粉酶 , 主要作用于淀粉水解的液化阶段 , 因此又叫液化酶。作为一种最重要的工业酶制剂，α - 淀粉酶广泛存在于动物 , 植物和微生物中。其中，微生物α - 淀粉酶以其经济易得成为工业生产主要来源。目前 , 关于 α- 淀粉酶活性的测定方法很多种。
本实验采用杨氏改良法测定 α - 淀粉酶；掌握测定α - 淀粉酶活性大小与温度关系的方法，通过分析得出酶的最适温度范围。二、实验原理
酶促反应中，反应速度达到最大值时的温度和 pH 值称为某种酶作用时的最
适温度和 pH 值。温度对酶反应的影响是双重的：一方面随着温度的增加，反应
速度也增加， 直至最大反应速度为止； 另一方面随着温度的不断升高， 而使酶逐步变性从而使反应速度降低，其变化趋势呈钟形曲线变化。
不同菌株产生的酶在耐热性、 酶促反应的最适温度、 PH、对淀粉的水解程度，以及产物的性质等均有差异。α - 淀粉酶属水解酶，作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α -1,4 糖苷键，迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降， 淀粉与碘的反应逐渐消失， 这种作用称为液化作用，生产上又称α - 淀粉酶为液化淀粉酶。 α- 淀粉酶不能水解淀粉支链的α -1,6 糖苷键，因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和α -1,6 键的寡糖。
本实验通过淀粉遇碘显蓝色，淀粉含量越高，颜色越深。用分管光度计检测显色效应大小，通过分管光度值计算酶活力
注意：实验中为了消除非酶促反应引起的淀粉水解带来的误差，每组实验都做了相应的对照实验， 在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。
在实验中要严格控制温度及时间，以减小误差。并且在酶的作用过程中，三
支测定管及空白管不要混淆。
三、材料、试剂与仪器
实验材料：α - 淀粉酶
仪器：分光光度计、电热恒温水浴锅、小台秤、研钵、玻璃仪器若干试剂：
NaOH/ CH3COOH及 HCl ：
% 工作碘液： 克 I 2 和 克 KI 水中研磨，定容至 1000mL；
1%糊化淀粉溶液：称取 克淀粉，加入 NaOH， 60℃5min，冷却后加 CH3COOH，定容至 100mL；
④ 稀释α - 淀粉酶溶液：待测样品
四、实验步骤
10mL1%淀粉溶液加入试管中，室温 25/45/65 ℃保温 10min
②于每管中