核酸的分离和检测课件.ppt

文档介绍：核酸的分离和检测
从哪儿提取（Where）？
怎么提取（How）？
提到什么程度（What）？
会出现什么问题（Questions）？怎样处理（Solution）？
核酸提取 标准和基础要求
核酸提取 通常过程
关键试剂 作用
核酸 部分特征
核酸提取 常见方法
核酸提取经典案例
核酸提取 注意事项
核酸提取出现 问题及对策
核酸提取 相关说明
关键内容
核酸提取 标准和基础要求
Principle and steps
Principle
保持核酸 完整性;
提升核酸 质量（纯度和浓度）。
Requirements for purification
不存在对酶有抑制作用 有机溶剂和过高浓度 金属离子;
其她事物大分子（Pr、sugar and lipid）
其她核酸污染
核酸提取 通常过程
Principle and steps
Steps
样品准备（取材）
破细胞（物理法、化学法、酶法）;
除杂质（蛋白质、脂类、糖类和不需要 核酸）;
沉淀提纯

－内容物释放
、纯化
, 并去除杂质
 

破碎细胞-方法
机械方法: 超声波处理法、研磨法、匀浆法;
化学试剂法: 用SDS或CTAB处理细胞;  
酶解法: 加入溶菌酶或蜗牛酶, 都可使细胞壁破碎。
破碎细胞-起源
动物: 小牛胸腺۰动物肝脏、血液和肌肉组织等۰鱼类精子;
植物: 种子 胚中都含有丰富 DNA。
微生物: 谷氨酸菌体含7%~10%, 面包酵母含4%, 啤酒酵母含6%, 大肠肝菌含9%~10%（培养过夜）。
Note: 从多种材料中提取DNA方法不一样, 分离提取 难易程度也不一样。 对于低等生物。如从病毒中提取DNA 比较轻易, 多数病毒DNA 分子量较小, 提取时易保持其结构完整性。 从高等动植物中提取DNA难度大部分。因分子量较大, 易被机械张力剪断。
破碎细胞（起源-方法）
微生物: 溶菌酶、SDS裂解。
高等植物: 捣碎器破碎、液氮研磨。
酶法: 蛋白酶, 如胰蛋白酶,
冰冻法: 反复冻融或液氮冻后组织捣碎。
动物: 液氮处理后用匀浆器破碎。
细胞器DNA: 首先纯化细胞器。

以上处理时均要同时加入核酸酶抑制剂