文档介绍：核酸提取原理和方法专业知识
关键内容
核酸介绍
基因组DNA提取
质粒DNA提取
真核细胞总RNA提取
琼脂糖凝胶电泳
核酸介绍
核酸是由核苷酸或脱氧核苷酸经过3′, 5′- 磷酸二酯键连接而成 一类生物大分子。包含核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)两类。
DNA关键储存遗传信息。
RNA关键传输遗传信息。
核酸介绍
如何分离RNA？
如何分离DNA？
核酸介绍——质粒DNA
质粒(Plasmid)是一个染色体外 稳定遗传因子, 大小从1-200 kb不等, 为双链、闭环 DNA分子, 并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。
质粒关键发觉于细菌、放线菌和真菌等细胞中, 它含有自主复制和转录能力, 能在子代细胞中保持恒定 拷贝数, 并表示所携带 遗传信息。
核酸介绍
基因组DNA提取
质粒DNA提取
真核细胞总RNA提取
基因组DNA提取方法
基因组DNA提取 多个常见方法:
CTAB法
SDS法
其她方法
基因组DNA提取——CTAB法
CTAB法原理（植物DNA提取经典方法）
CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide, 十六烷基三甲基溴化铵）, 是一个阳离子去污剂, 可溶解细胞膜, 并与核酸形成复合物。
该复合物在高盐溶液中（> mol/L NaCl）是可溶 , 经过有机溶剂抽提, 去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
基因组DNA提取——CTAB法
CTAB提取缓冲液 经典配方
组份
Tris-HCl （pH ）
EDTA （pH ）
NaCl
CTAB
β-巯基乙醇
终浓度
100 mM
20 mM
M
2% (W/V)
%（V/V）使用前加入
Tris-HCl （pH ）提供一个缓冲环境, 预防核酸被破坏;
EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子, 抑制DNase活性;
NaCl 提供一个高盐环境, 使DNP充足溶解, 存在于液相中;
CTAB溶解细胞膜, 并结合核酸, 使核酸便于分离;
β-巯基乙醇是抗氧化剂, 有效地预防酚氧化成醌, 避免褐变, 使酚轻易去除。
基因组DNA提取——CTAB法
CTAB提取缓冲液 改善配方
组份
Tris-HCl （pH ）
EDTA （pH ）
NaCl
CTAB
PVP40
β-巯基乙醇
终浓度
100 mM
20 mM
M
3% (W/V)
5% (W/V)
2%（V/V）使用前加入
PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚 络合物, 能与多酚形成一个不溶 络合物质, 有效去除多酚, 降低DNA中酚 污染; 同时它也能和多糖结合, 有效去除多糖。