文档介绍：实验一可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定一、实验原理?可溶性还原糖+ ?蛋白质+ ?脂肪+ 斐林试剂双缩脲试剂砖红色沉淀苏丹Ⅲ染液苏丹Ⅳ染液橘黄色红色紫色颜色反应二、几种重要的试剂?斐林试剂甲液( 的NaOH 溶液) 乙液( 的CuSO 4溶液) 现配现用混合均匀?双缩脲试剂 A液( 的NaOH 溶液) B液( g/mL 的CuSO 4溶液) 现配现用先加 A液再加 B液?苏丹Ⅲ(Ⅳ)染液:用来鉴定脂肪的存在四、实验方法与步骤?1、可溶性还原糖的鉴定(1) 制备组织样液:苹果洗净、去皮、切块→取5g加少许石英砂研磨→加5mL 水再研磨→漏斗垫纱布后过滤,得到样液(2)鉴定样液:取 2mL 样液于试管中→注入 2mL 刚配制的斐林试剂,振荡混合(淡蓝色) →水浴煮沸 2min 左右,观察溶液颜色变化(先变为棕色,再变为砖红色) 制备生物组织样液取材、研磨、过滤取样取2 ml 组织样液注入试管注入试管中注入试剂向试管中注入 2 ml 刚配制的斐林试剂加热和观察(将4—5滴乙液滴入 2 ml 甲液中) ?2、脂肪的鉴定(1) 切片制作(2) 染色:在花生子叶切片上滴 2~3滴苏丹Ⅲ染液→2~3min 中后,吸去染液→滴体积分数为50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精,再滴1~2滴蒸馏水,盖上盖玻片(3) 镜检鉴定:在低倍物镜下观察,找到花生子叶切片的最薄处,移至视野中央→转动转换器,换用高倍物镜观察(脂肪滴:橘黄色的圆形小颗粒) 制备实验材料去种皮、削平面、切片染色滴2—3滴苏丹Ⅲ染液染色 2—3分钟去浮色在玻片上滴 1—2滴体积分数为 50% 酒精溶液,洗去浮色制作临时装片放在显微镜下观察(先低倍后高倍) ?2、蛋白质的鉴定(1) 制备组织样液:浸泡黄豆 1~2d→去皮、切成薄片,加少许石英砂及 5mL 水研磨→漏斗垫纱布后过滤,得到样液(用蛋清要稀释 10倍以上,否则实验后黏住试管壁不易洗净) (2) 鉴定样液:取 2mL 样液于试管Ⅰ中→加入 2mL 双缩脲试剂 A液摇匀(造成一个碱性环境) →加入双缩脲试剂 B液3~4滴,摇匀,注意颜色变化(溶液变为紫色)。另取清水于试管Ⅱ中→加入摇匀→颜色变化,作为。 2mL (A液、 B液) 无对照制备生物组织样液取材研磨过滤或制备蛋清液注入组织样液取一支试管注入黄豆组织液(或蛋清液) 2 ml注入试剂 A 加入 2 ml 双缩尿试剂 A加入双缩尿试剂B 观察颜色变化五、注意事项[ 1]斐林试剂很不稳定,故应将组成斐林试剂甲液( g/ml 的 NaOH 溶液)和乙液( 0 .05 g/ml 的硫酸铜溶液)分别配制、储存,使用时再临时配制,将 4—5滴乙液滴入 2 ml 甲液中,配完后立即使用。[2] 双缩尿试剂的使用,应先加 A( 的 NaOH 溶液),造成碱性的反应环境,再加 B 液( 0 .01g/ml 的硫酸铜溶液)。