文档介绍：酶联免疫吸附测法ELISA法
复杂生物体系中生命物质 化学测量是揭示生命奥秘 关键手段, 在食品检验、疾病诊疗和预防 过程中也日益凸现其关键作用。
经典 化学分析方法（滴定分析、重量分析、简单 吸光光度法）是以简单离子或分子为检测对象 常量或微量分析, 面对生物体系成份复杂且待测物浓度较低 测试条件则往往无能为力。
于是, 一系列针对生物体系中化学成份 测量方法应运而生。免疫化学分析即其关键组员, 它将免疫学知识与化学分析手段有机结合, 为生命体系中高特异性、超微量 分析提供了处理方法。
什么是 酶联免疫分析技术
ELISA 基础原理和方法
ELISA 种类和改变
ELISA 特点
ELISA 应用实例
1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质 固相免疫测定方法, 即酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA) 。ELISA现在已成为现在分析化学领域中 前沿课题 , 它是一个特殊 试剂分析方法, 是在免疫酶技术( immunoenzymatic techniques ) 基础上发展起来 一个新型 免疫测定技术 。
一、基础原理
它采取抗原与抗体 特异反应将待测物与酶连接, 然后经过酶与底物产生颜色反应, 用于定量测定。测定 对象能够是抗体也能够是抗原。
在这种测定方法中有3种必需 试剂:
①固相 抗原或抗体（免疫吸附剂）
②酶标识 抗原或抗体（标识物）
③酶作用 底物（显色剂）
测量时, 抗原（抗体）先结合在固相载体上, 但仍保留其免疫活性, 然后加一个抗体（抗原）与酶结合成 偶联物（标识物）, 此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性, 当偶联物与固相载体上 抗原（抗体）反应结合后,
再加上酶 对应底物, 即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。
其所生成 颜色深浅与欲测 抗原（抗体）含量成正比。
这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察, 也能够用分光光度计（酶标仪）加以测定。
其方法简单, 方便讯速, 特异性强。
二、酶及其底物
酶结合物是酶与抗体或抗原, 半抗原在交联剂作用下联结 产物。是ELISA成败 关键试剂, 它不仅含有抗体抗原特异 免疫反应, 还含有酶促反应, 显示出生物放大作用, 但不一样 酶选择不一样 底物 , 将得到不一样 颜色反应.
酶
底 物
显色反应
测定波长
辣根过氧化物酶
邻苯二*** 四甲替联苯*** 氨基水杨酸 邻联苯甲*** 2,2‘-连***基-2(3-乙基-并噻唑啉磺酸-6)铵盐
橘红色 黄色 棕色 兰色 蓝绿色
492
460
449 425 642
碱性磷酸酯酶
4-硝基酚磷酸盐(PNP) 萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐
黄色 红色
400 500
葡萄糖氧化酶
ABTS+HRP+葡萄糖 葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑兰
黄色 深蓝色
405
420
β-Ｄ－半乳糖苷酶
***伞***基半乳糖苷(4MuG) 硝基酚半乳糖苷(ONPG)
荧光 黄色
360,450 420
ELISA 种类和改变
（一）双抗体夹心法
（二）间接法
（三）竞争法
（四）双位点一步法
（五）捕捉法测IgM抗体
（六）应用亲和素和生物素 ELISA