文档介绍：蛋白质的颜色反应蛋白质的颜色反应和沉淀反应和沉淀反应一、实验目的一、实验目的 1. 、颜色反应熟悉蛋白质的沉淀反应、颜色反应 2. 、颜色反应的机理。了解蛋白质的沉淀反应、颜色反应的机理。二、实验原理二、实验原理蛋白质分子中的某些基团与显色剂作用,可产蛋白质分子中的某些基团与显色剂作用,可产生特定的颜色反应,不同蛋白质所含氨基酸不生特定的颜色反应,不同蛋白质所含氨基酸不完全相同,颜色反应亦不同。颜色反应不是蛋完全相同,颜色反应亦不同。颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物质亦可产生相白质的专一反应,一些非蛋白物质亦可产生相同颜色反应,因此不能仅根据颜色反应的结果同颜色反应,因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物是否是蛋白质。颜色反应是一些常决定被测物是否是蛋白质。颜色反应是一些常用的蛋白质定量测定的依据。用的蛋白质定量测定的依据。(一)蛋白质的颜色反应原理(一)蛋白质的颜色反应原理(二)蛋白质的沉淀反应原理(二)蛋白质的沉淀反应原理蛋白质的水溶液是一种比较稳定的亲水胶体, 蛋白质的水溶液是一种比较稳定的亲水胶体, 这是因为蛋白质颗粒表面带有很多极性基团,如这是因为蛋白质颗粒表面带有很多极性基团,如-NH3 -NH3 + +, , -COO -COO - -, , -SH -SH 等和水有高度亲和性,当蛋等和水有高度亲和性,当蛋白质与水相遇时,就很容易被蛋白质吸住,在蛋白质与水相遇时,就很容易被蛋白质吸住,在蛋白质颗粒外面形成一层水膜白质颗粒外面形成一层水膜( (又称水化层又称水化层) )。水膜。水膜的存在使蛋白颗粒相互隔开,颗粒之间不会碰撞的存在使蛋白颗粒相互隔开,颗粒之间不会碰撞而聚成大颗粒。因此蛋白质在溶液中比较稳定而而聚成大颗粒。因此蛋白质在溶液中比较稳定而不会沉淀。不会沉淀。蛋白质能形成较稳定的亲水胶体的另一个原因, 蛋白质能形成较稳定的亲水胶体的另一个原因, 是因为蛋白质颗粒在非等电状态时带有相同电是因为蛋白质颗粒在非等电状态时带有相同电荷,使蛋白质颗粒之间相互排斥,保持一定距荷,使蛋白质颗粒之间相互排斥,保持一定距离,不致相互凝集沉淀。离,不致相互凝集沉淀。蛋白质由于带有电荷和水膜,因此在水溶液中形蛋白质由于带有电荷和水膜,因此在水溶液中形成稳定的胶体。当某些物理化学因素破坏了蛋成稳定的胶体。当某些物理化学因素破坏了蛋白质的水膜或中和了蛋白质的电荷,则蛋白质白质的水膜或中和了蛋白质的电荷,则蛋白质胶体溶液就不稳定而出现沉淀现象。胶体溶液就不稳定而出现沉淀现象。蛋白质变性后蛋白质变性后, ,有时由于维持溶液稳定的条件有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在仍然存在( (如电荷如电荷), ),并不析出并不析出. .因此变性蛋白因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀质并不一定都表现为沉淀, ,而沉淀的蛋白质而沉淀的蛋白质也未必都已变性也未必都已变性. . 三、实验仪器、试剂和材料三、实验仪器、试剂和材料 1. :将鸡蛋白用蒸馏水稀释卵清蛋白液:将鸡蛋白用蒸馏水稀释 20 20~ ~ 40 40倍, 倍, 2 2~ ~3 3 层纱布过滤,滤液冷藏备用。层纱布过滤,滤液冷藏备用。 2. :称硫酸铵饱和硫酸铵溶液:称硫酸铵 850g 850g 加于加于 1000mL 1000mL 蒸馏水中, 蒸馏水中, 在在 70 70~ ~ 80 80℃℃下搅拌促溶,室温中放置过夜,瓶底析出下搅拌促溶,室温中放置过夜,瓶底析出白色结晶,上清液即为饱和硫酸铵溶液。白色结晶,上清液即为饱和硫酸铵溶液。 % % 醋酸铅溶液醋酸铅溶液 % % 硫酸铜溶液硫酸铜溶液 % % 茚三***溶液: 茚三***溶液: 茚三***溶于茚三***溶于 95% 95% 乙醇并稀释至乙醇并稀释至 100mL 100mL 。。 6. ***:比重浓***:比重。。 7. 、吸管、量筒等。试管及试管架、吸管、量筒等。四、操作步骤四、操作步骤( (一一) )蛋白质的颜色反应蛋白质的颜色反应 1. ??原理:当尿素经加热至原理:当尿素经加热至 180 180 ℃℃左右时,两分子尿左右时,两分子尿素脱去一分子氨,进而缩合成一分子双缩脲。在素脱去一分子氨,进而缩合成一分子双缩脲。在碱性条件下双缩脲与铜离子结合成红紫色络合物, 碱性条件下双缩脲与铜离子结合成红紫色络合物, 此反应称为双缩脲反应。多肽及蛋白质分子结构此反应称为双缩脲反应。多肽及蛋白质分子结构中均含有许多肽键,其结构与双缩脲分子中的亚中均含有许多肽键,其结构与双缩脲分子中的亚酰***键相同。因此,在碱性条件下与铜离子也能酰***键