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货号：QS2627 规格：50管/48样
葡萄糖脱氢酶（Glucose dehydrogenase , GCDH试剂盒说明书
紫外分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
）催化D-葡萄糖和NAD（P生成D-葡萄糖酸和NAD（P）H大量存在于高等 动物的肝脏和弱氧化醋杆菌中。在低聚果糖生产中使用GCDH不仅能去除低聚果糖中的葡萄糖 提高低聚果糖的含量，而且生成的葡萄糖酸与钙离子结合生成的葡萄糖酸钙是一种理
想的补钙制剂。因而，GCD已成为制备高含量低聚果糖的理想用酶。
测定原理：
GCD催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH在340nm下测定NADHt升速率，即 可反映GCDI活性。
自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、 1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体60mL<l瓶，4C保存；
试剂一： mLXl瓶，4C保存；
试剂二：粉剂X 1瓶，-20 C保存；
样本的前处理：
组织的前处理：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1： 5~10的比例（ 织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4C离心10min,取上清，置冰上待测。
细菌或培养细胞的前处理：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清； 按照细菌或细胞数
量（104个）：提取液体积（mL为500~1000: 1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取 液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W超声3s,间隔10s，重复30次）；8000g 4C离心10mi n,取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm蒸馏水调零；
2、 工作液的配制：临用前将试剂二转移到试剂一中混合溶解待用； 用不完的试剂分装后-20 C 保存，禁止反复冻融。
3、 将工作液置于37 E预热5分钟。
4、 在1mL石英比色皿中加入50卩L样本和950卩L工作液，立即混匀，记录340nm处初始吸光 值A1和1min后的吸光值A2,计算△ A=A2-A1。
GCD活性计算：
（1） 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GCDHimol/min/mg prot ） = [ △ AXV 反总* （ £ X d） X 109]宁（V 样X Cpr）宁 T=3215X