文档介绍：时间分辨荧光免疫分析技术
标识免疫学分析技术发展历程
免疫荧光分析(Coons, 1941)
放射免疫分析(Berson和Yalow, 1960)
酶免ELISA (Engvall, 1971)
金标免疫分析(Faulk和Taylor, 1971)
化学发光免疫分析(Arakawa, 1977)
时间分辨荧光免疫分析(Soini和Hemmila, 1979)
电化学发光免疫分析(Leland, 1990)
液相芯片(美国Luminex企业, 1997)
①免疫荧光
②放射免疫
④化学发光
⑥电化学发光
⑤时间分辨荧光
③酶联免疫
标识免疫技术理论检测灵敏度
放射免疫 10-10-10-12 mol
酶联免疫 10-9-10-10 mol
化学发光 10-15 mol
时间分辨荧光 10-18 mol
电化学发光 10-18 mol
一、时间分辨荧光免疫分析（TRFIA） （Time-resolved fluorescence immunoassay）
背景介绍
基础原理
技术特点
反应模式
背景介绍
1979年, 芬兰Wallac企业研发部Soini 和 Hemmila首次提出了建立
稀土离子标识物“时间分辨荧光免疫分析”理论
1983年, Soini 和 Kojola首先开发出以镧系元素为示踪物时间分辨
荧光测量仪, 建立了新非放射性微量分析检测技术。同一年,
Pettersson等人利用此仪器首次对人绒膜促性腺激素 (hCG)进行了时间
分辨荧光免疫分析
1984年, Hemmila确定了DELFIA(Dissociation Enhanced Lanthanide
Fluoroimmunoassay)这种时间分辨免疫分析技术方案,从而使DELFIA成
为Wallac专利技术
1988年, 加拿大CyberFluor企业Diamandis创建了一个不一样于DELFIA
时间分辨荧光免疫分析, 即FIAgen
2003年, 时间分辨荧光分析技术获国家科技进步二等奖
基础原理
三价稀土离子包含有铕(Eu), 钐（Sm), 铽 (Tb) , 镝 (Dy)
等, 它们荧光光谱含有特异性强﹑ Stokes位移大﹑寿命长
特点
DELFIA采取异硫***酸苄基二亚乙基三***四乙酸铕(DTTA-Eu)
为双功效螯合试剂, 其一端螯合Eu3+, 另一端可与蛋白质-
NH2 连接。在中性或靠近中性pH 条件下, DTTA 与Eu3+具
有足够螯合稳定性, 而在增强液（呈酸性）作用下, DTTA-
Eu 又能将螯合Eu3+快速、根当地释放出来并与增强液中
配体螯合﹑进入胶束疏水内核, 使Eu3+荧光得以成千万倍地
放大
FIAgen采取是以Eu3+螯合物配基BCPDA为标识物,
经过检测其与过量Eu3+形成螯合物荧光进行定量。因为
BCPDA 可检测性不够理想, FIAgen 需要利用生物素-
亲合素信号放大来填补BCPDA 检测灵敏度不足
DELFIA标识技术
碱性
时间:(µs）
0
400
800
1000
340nm激发光
第二个循环
荧光
短寿命荧光
613nm长寿命荧光
延迟时间
测值时间
经过时间延迟, 将特异性荧光与非特异性荧光
分辨开来, 使理论本底达成0
300
400
500
600
荧光强度
激发光
发射光
波长(nm)