文档介绍：细菌的涂片和简单染色法和革兰氏染色法（法）
【目要求】
学习并了解简单染色法原理, 并掌握其操作方法。
掌握微生物涂片、染色基础技术和无菌操作技术。
了解革兰氏染色法原理, 并掌握其操作方法。
了解革兰氏染色法在细菌分类判定中关键性。
学习并掌握微生物涂片、染色基础技术和无菌操作技术。
巩固显微镜(油镜)使用方法。
【基础原理】
一、细菌涂片及简单染色法基础原理
细菌涂片和染色是微生物学试验中一项基础技术。
所谓简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色一个方法。此法操作简便, 可用以观察微生物形状、大小及细胞排列状态, 是微生物技术中应用广泛, 操作简便染色法。
【基础原理】
用于生物染色染料关键有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。
染色前必需先固定细菌, 其目有二: 一是杀死细菌, 使细胞质凝固, 菌体粘附于玻片上; 二是增加其对染料亲和力。常见有加热和化学固定两种方法。固定时应尽可能维持细胞原有形态, 预防细胞膨胀或收缩。
【基础原理】
二、革兰氏染色法（经典法）基础原理
革兰氏染色反应是细菌分类和判定关键性状
革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌形态而且还可将全部细菌区分为两大类: 染色反应呈蓝紫色称为革兰氏阳性细菌, 用G+表示; 染色反应呈红色（复染颜色）称为革兰氏阴性细菌, 用G-表示。
【试验用具】
1、菌种 金黄色葡萄球菌, 大肠埃希氏菌（注: 大肠杆菌是革兰氏阴性杆状细菌, 金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性球状细菌, 经过革兰氏染色, 二者着上不一样颜色, 在显微镜下便于区分。同时, 因为二者含有不一样个体形态, 在对它们混合涂片进行革兰氏染色后, 依据菌体颜色和形态差异, 能够判定染色是否成功。）
2、仪器 显微镜(25台);
3、材料 载玻片（每组4个）, 酒精灯（每组1个）, 接种环（每组1个）, 擦镜纸, 二甲苯、香柏油, 吸水纸, 染色缸等;
【试验用具】
4、染料 草酸铵结晶紫（Crystal Violet , CV）、沙黄、吕氏碱性美蓝染液。
1）草酸铵结晶紫染液配制:
A液: 结晶紫 2g
95％乙醇 20ml
B液: 草酸铵
蒸馏水 80ml
需在用前48h将A液、B液混合, 装入棕色试剂瓶内备用。
【试验用具】
2）沙黄染液配制:
A. 贮存液: 沙黄
95％乙醇 100ml
B. 应用液: A液 10ml
蒸馏水 90m
【试验用具】
3）吕氏(Loeffler)碱性美蓝染液
A液: 美蓝(methylene blue)
95%酒精 30ml
B液: KOH
蒸馏水 100ml
分别配制A液和B液, 配好后混合即可。
【方法步骤】
一、细菌涂片及简单染色法
涂片
固定
染色
水洗
干燥
镜检
清理
干燥