文档介绍：关于酶联免疫吸附试验检测伤寒O抗体
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摘要
目的：检测伤寒O抗体一般采用肥达实验（直接凝集实验），在临床诊断中有重要的意义。能否建立一个用酶联免疫吸附法检测血清中抗伤寒“O”抗体的实验体系，提高临床诊断效果是本实验要解决的关键问题。
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原理：以伤寒O抗原免疫动物，制备出抗伤寒O抗体，将后者纯化，与酶连接制备成酶标抗体，以伤寒O抗原包被酶标板，以制备的伤寒酶标抗体为竞争抗体，可以构成竞争法检测伤寒抗体的酶联免疫实验。
摘要
第三页，本课件共21页
摘要
结果：成功建立了一个酶联免疫吸附试验检测伤寒O抗体的实验体系
结论：酶联免疫吸附法可以检测血清中抗伤寒“O”抗体
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实验方法
实验材料：
实验动物：家兔（，一般不咬人，但其爪锐利，挣扎时易抓伤操作人员 ，可保证产生抗体 ，血量多，得到的血清可保证实验顺利进行）
实验试剂：饱和硫酸铵溶液 PBS透析液 辣根过氧化物酶(HRP) NaIO4溶液 %乙二醇溶液 硼氢化钠溶液 包被稀释液 酶标抗体 待测抗体 稀释液 洗涤液 底物液
实验器材：兔笼 透析膜 离心机 加样器 酶标板
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实验步骤
1
2
3
4
制备伤寒O抗体
纯化
抗体
酶与抗体的连接
ELISA
竞争检测
伤寒O抗
体（预实验
和正式实验）
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制备伤寒O抗体
颗粒性抗原伤寒杆菌
备注
第一周
第一天
-1ml，分离血清，待用
第二天
第三天
第四天
第二周
加强免疫：（）
第三周
耳中央动脉采血，分离血清
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纯化抗体
1份血清（5ml）+ 1份生理盐水 + 2份饱和硫酸铵
置试管中 2000转离心20min
弃上清
~2ml NS 溶解沉淀
透析24h
收集、标记、冰冻 5管
缓缓摇动 ,室温2h（）
盐析法
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酶与抗体的连接
实验原理：NaIO4是强氧化剂，能将HRP的甘露糖部分（与酶活性无关的部分）的羟基氧化成醛基，然后与抗体的氨基结合，形成酶标抗体，反应式如下：
实验方法：
标记过程：
ml HAC-NaAc 缓冲液中（老师做）。
,此时酶的颜色由黄变绿。4℃作用30min。
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酶与抗体的连接
%（稳定剂）终止反应，室温30min 。
~, ，4℃过夜。
，4℃2小时。
PBS液透析过夜，收集、标记成酶标记抗体和冻存
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