文档介绍：PCR扩增技术
第一页，共25页。
DNA聚合酶
引物
引物
M13噬菌体
Sanger的测序技术
引物
DNA聚合酶
第二页，共25页。
引物
引物
Mullis的构思
DNA聚合酶
DNA聚合酶
特定DN***段
第三页，共25页。
94℃变性
50-65℃退火
XX℃延伸
第四页，共25页。
Taq DNA聚合酶（thermus aquaticus)
酶活性(%)
温度(℃)
40 50 60 70 80 90 100
100
80
60
40
20
第五页，共25页。
72℃
94℃
55℃
PCR循环
第六页，共25页。
一、PCR的基本原理
PCR技术实际上是DNA的体外扩增技术。
其原理类似于DNA在体内的复制过程。
只要提供一个合适的条件――模板DNA、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、四种dNTP原料和合适的缓冲液体系，在一定的温度下，经过重复的过程，就可以完成DNA的体外合成。
PCR反应是一个重复进行的DNA复制过程，需要重复进行：模板的解链、引物与模板的结合（粘合）、DNA聚合酶催化新链DNA的合成。
第七页，共25页。
这些过程都是通过控制温度来实现的，即通过改变温度引起变性（denature）、退火（annealing）和延伸（extension），使DNA得以复制。
1、变性
通过加热至95℃左右，使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA，作为反应的模板。
2、退火
将温度降至引物的Tm值左右或以下（比Tm低5℃，通常为55～65℃），引物与DNA模板互补结合，形成杂交链。
第八页，共25页。
3、延伸
在DNA聚合酶（一种耐热的DNA聚合酶）的作用下，于70～74℃以引物3′端为起始点按5′→3′方向使DNA新链延伸。
上述三步为一个循环，每一循环的产物作为下一个循环的模板，如此经过25－30个循环，可使新生的DN***段得以扩增106－9倍（至少扩增105 倍）。
PCR的反应原理也就是PCR的基本过程。
第九页，共25页。
1
2
3
4
5
22
55
72
94
时间（min）
温度
（℃）
PCR的基本原理
PCR反应条件
PCR过程
PCR的特点
适温延伸
3
高温变性
1
低温退火
2
重复1~3步
25~30轮
目的DN***段
扩增100万倍以上
DNA双螺旋
DNA单链
与引物复性
DNA变性
形成2条单链
子链延伸
DNA加倍
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