目的基因的PCR扩增课件.ppt

文档介绍：目的基因的PCR扩增
一、试验目
经过本试验学****PCR反应基础原理, 掌握PCR基础操作技术以及琼脂糖凝胶电泳技术。
PCR（polymerase chain reaction) :
聚合酶链式反应, 又称体外DNA扩增技术。
是一个体外扩增特异DN***段技术。
二、试验原理
二、试验原理
PCR用于扩增位于两端已知序列之间DNA区段, 即经过引物延伸而进行反复双向DNA合成。基础原理及过程以下:
PCR循环过程中有三种不一样事件发生: （1）模板变性
（2）引物退火
（3）热稳定DNA聚合酶进行DNA延伸合成。
二、试验原理
1、变性: 加热使模板DNA在高温下（94-95℃）变性, 双
链间氢键断裂而形成两条单链, 即变性阶段。
2、退火: 在体系温度降至37-65℃, 模板DNA与引物按碱基
配对标准互补结合, 使引物与模板链3’端结合, 形成部分
双链DNA, 即退火阶段。
3、延伸: 体系反应温度升至中温72℃, 耐热DNA聚合酶以单
链DNA为模板, 在引物引导下, 利用反应混合物中4
种脱氧核苷三磷酸（dNTP）, 按5’到3’方向复制出互补
DNA, 即引物延伸阶段。
5’
3’
3’
5’
高温变性
低温退火
中温延伸
不停循环
聚 合 酶 链 式 反 应 示 意 图
目片段
模板
引物对
二、试验原理
上述3步为一个循环, 即高温变性、低温退火、中温延伸3个阶段。从理论上讲, 每经过一个循环, 样本中DNA量应该增加一倍, 新形成链又可成为新一轮循环模板, 经过25～30个循环后DNA可扩增106～109倍。
经典PCR反应体系由以下组分组成: DNA模板、反应缓冲液、dNTP、MgCl2、两条合成DNA引物、耐热DNA Taq聚合酶。
PCR 的基本反应步骤
变性
95˚C
延伸
72˚C
退火
Tm-5˚C
二、试验原理
二、试验原理
二、试验原理