文档介绍：IBMT standardization office【IBMT5AB-IBMT08-IBMT2C-ZZT18】
实验四聚丙烯酰***凝胶电泳修订版
实验四 聚丙烯酰***凝胶电泳
实验目的
***凝胶电泳的原理及其应用范围；
***凝胶电泳相关缓冲液的配制方法。
实验原理
***凝胶简称为PAGE为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰***凝胶电泳（Native-PAGE）及十二烷基硫酸钠——聚丙烯酰***凝胶（SDS-PAGE）；
***凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。而SDS-PAGE仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。
，具有变性和助溶特性，可按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，并打断蛋白质的氢键和疏水键，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷， 使SDS蛋白质复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响；
-PAGE可使蛋白质在Tris-甘氨酸()缓冲液中，通过电泳的方法分离不同分子量蛋白质或测定蛋白质分子量的实验技术。
实验步骤
（一）相关溶液的制备
1. 30%丙烯酰***（Acr）：称Acr 29g，甲叉双丙烯酰***（Bis）1g，加蒸馏水至100mL，过滤后置棕色瓶中，4℃贮存可用1-2月。
2. 10%SDS（十二烷基磺酸钠）：10g SDS 68℃助溶于纯水。
3. Tris-HCl缓冲液：，加入50mL水，用1mol/， 最后用蒸馏水定容至100ml。
4. -HCl缓冲液：，加入50mL水，用1mol/， 最后用蒸馏水定容至100mL
5. 10%过硫酸铵(AP)
6. TEMED（四***乙二***）
7. 2×样品溶解液： Tris-HCl() 1mL， SDS200mg，β- （临用前加入，也可以200mmol/L二硫苏糖醇代替），溴酚蓝3mg，甘油2mL， 最后定容至10mL。
：取50%甲醇溶液90mL，冰乙酸10mL混匀，溶解称取考马斯亮蓝R250 0. 25g（可适当减少），过滤后备用。
： 甲醇300mL ，冰乙酸100mL，蒸馏水定容至1L。
10. 5× Tris-甘氨酸电泳缓冲液()：，甘氨酸94g，加入50mL 10%SDS，加蒸馏水使其溶解后定容至1L。
（二）制胶过程
配制分离胶溶液（以12% 5mL PAGE为例）凝胶配制过程要迅速, 催化剂TEMED要在注胶前再加入。注胶过程要一次性完成,避免产生气泡。
成分
加入量
TEMED
2μL
10%AP
50μL
10%SDS
50μL
-HCl()
30%Acr-Bis
H2O
2. 配制浓缩胶溶液（以5% 3mL PAGE为例）浓缩胶