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黄曲霉毒素地测定ELISA法.doc

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黄曲霉***的测定ELISA法
测试前请仔细阅读本说明
在2—8℃冷藏—不要冻结
1.简介 黄曲霉***
黄曲霉***是一种剧毒且致癌的物质,它是由黄曲霉菌和寄生曲霉菌A的某些菌株产生的。黄曲霉***有四种类型:B1,B2,G1和G2。黄曲霉***B1是毒性最大且最常有的。最容易产生黄曲霉***污染的物质是谷物、花生、棉子、高梁和大多数的树果。
动物食入过量黄曲霉***的影响从慢性健康直到死亡,已经证明黄曲霉***能引起肝损坏或癌症、降低奶和蛋的产出、免疫抑制和干扰再生效率。
美国食品药物管理局已经规定了食品和饲料中最大黄曲霉***限量。因此,准确测定黄曲霉***的含量,对于监测可能发生黄曲霉***污染的食品和饲料的质量来说,是非常重要的。测试程序包括仔细的采样、化学提取、卫生学评价和定量分析。

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美国食品药物管理局已经颁布的黄曲霉***限量如下:
适用对象
限量
物质

20ppb
除牛奶外的所有食品
所有动物
20ppb
所有饲料〔如下除外〕
除外:


种牛,种猪,成熟的家禽
100ppb
谷物
育肥期的猪〔>100磅〕
200ppb
谷物
育肥期的菜牛
300ppb
谷物
育肥期的菜牛、猪、家禽
300ppb
棉籽粉

本测试盒的测试原理是一种竞争性的直接酶联免疫吸附剂测试方法〔ELISA〕,可准确检测出样品中ppb级的黄曲霉***。样品和标准控制液中游离的黄曲霉***与轭合物中的黄曲霉***竞争抗体结合位置。清洗后,参加底物,底物与轭合物反响出现兰色,兰色越深明确黄曲霉***越少。将其置于微型孔阅读器中可读出透光度,以控制标准液的透光度作标准曲线,将样品的透光度与标准曲线比拟计算出样品中黄曲霉***的准确浓度。

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本试剂盒存放在2~8℃时,可以一直使用到标签上注明的到期日期。


48个包被了抗体的孔;48个红色标记的混合孔;4瓶1.5ml浓度为0、5、15、50ppb黄曲霉***控制标准液(黄色标签)〔甲醇溶液的处理,见须知事项〕;1瓶7ml黄曲霉***-HRP轭合物溶液(兰色标签);1瓶24mlK兰底物溶液(绿色标签);1瓶32ml红色 (红色标签)。

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70%甲醇溶液;100ml量筒;150ml的具塞三角瓶;滤纸;样品收集具塞试管;漏斗;粉碎机;称量为5~25克的秤;带450nm滤光片的酶标仪;200μl移液器;200μl吸咀;纸巾或等效的吸水材料;计时器;防水记号笔;洗瓶;移液器用的试剂槽;蒸馏水或去离子水;12通道移液器

甲醇易燃,其容器应密闭并远离热、火花、明火和烟。如果吞下或吸入蒸气,它是有毒的。应防止与皮肤接触。本测试盒不使用时应在2~8℃下存放。不要使用过期的测试盒。不要把不同测试盒中的试剂混合使用。遵守正确的移液技术,包括取液前先用该液润洗一次。放置时间与本说明不一致时,可能会出现错误的结果。测试盒应先恢复到室温状态(18~30℃)后才开始使用。防止测试盒在室温下长时间放置。不要使测试盒冻结。应将包括样品提取液在内的所有废液和实验器皿进展处理〔如同已被黄曲霉***污染一样〕。应始终穿戴手套和其它防护服。为了防止交叉污染,每个样品应使用清洁的吸咀和玻璃器皿,并在样品之间彻底清洗所有的玻璃器皿。待测样品的pH值应为6~8。酸碱过大的样品应进展调整。关于pH值的调整,请技术服务部门联系。每次试验不要超过24孔。

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K-兰底物随时可用,底物为清亮的浅兰色,如果变成了深兰,如此弃去。使用时,只倒出所需量到试剂槽中,未用完的不要再倒回试剂瓶中。不使用时应盖住试剂槽,以防止光的照射。


待测样品应按公认的采样技术采集。样品应磨碎并充分混合后再提取。测试前,将样品在2~8℃存放。按以下程序进展:
1 将7份分析级甲醇与3份蒸馏水或去离子水混合配成70%的甲醇溶液。
取1份代表性样品。研磨样品至至少有75%的样品通过20目的筛子,颗粒尺寸大约相当于细的速溶咖啡。

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把5克研磨过的样品参加到25ml 70%的甲醇中,然后用力摇动15分钟。
用滤纸过滤出至少5ml的提取液。该滤液即为样品的待测液。
该待测液即可用于测试。

测试前应将所有的试剂恢复至室温〔18~30℃〕。
7.2.1从箔包中取红色标记混合孔,放在孔架上。
7.2.2取同样数量的包被了抗体的孔。把暂不使用的孔放回到箔包中,并重新密封,以保护抗体。
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