文档介绍：Q/KM — ZJ— —
液体洗涤剂杀菌实验规程
（内部使用）
年月日内部执行
质量管理中心实验室
引用原则
1、GB15979- 一次性使用卫生用品卫生原则
2、QB/T2738- 日化产品抗菌抑菌效果评价办法
3、QB/T2850- 抗菌抑菌型洗涤剂
4、年版《消毒技术规范》 ( 中华人民共和国卫生部 )
5、年版《药物微生物学检查手册》（科技出版社）
杀菌率实验规程
1、实验菌、实验温度、作用时间、试液浓度
实验菌种：金黄色葡萄球菌（ ATCC 6538），大肠杆菌（ 8099 或 ATCC 25922），白色念珠菌。实验温度： 20℃± 1℃。
作用时间：最短不得不大于 30s。常规作用时间为 2min、5min、10min、20min。试液浓度：中和剂鉴定用试液浓度应为正式杀菌实验最高浓度。
菌悬液用量：正式杀菌实验用菌悬液浓度、取量应与中和剂鉴定中 1 组、2 组所用菌悬液浓度、取量相似。
2、细菌繁殖体悬液、菌片制备程序：
菌悬液制备
⑴ 取冻干菌种管，在无菌操作下，以毛细吸管加入适量营养肉汤，轻柔吸吹多次，使菌种融化分散。
取含 - 营养肉汤培养基试管，滴入少量菌种悬液，置 37℃培养 18h～24h。用接种环取第 1 代培养菌悬液，划线于营养琼脂培养基平板上，于 37℃培养 18h～24h。挑取上述第 2 代培养物中典型菌落，接种于营养琼脂斜面，于 37℃培养 18h～24h，即为第 3 代培养物（放在 4℃左右冰箱中保藏。每隔 2-3 个月移种一次，继续保藏。）。
⑵ 取第 3 代～ 14 代营养琼脂培养基斜面新鲜培养物（经 18h～ 24h 培养），用吸管吸取 - 稀释液加入斜面试管内，重复吹吸，洗下菌苔。随后，用吸管将洗液移至另一无菌试管中，在手掌上振敲 80 次（力度适中，勿溅出），以使细菌悬液均匀。或从新鲜菌种斜面沾取少量菌苔，接种在适合实验菌生长培养基中， 37℃培养 18h～ 24h（或适当时间）。作为原菌液。（源于《药物微生物学检查手册》 211 页）
⑶ 细菌繁殖体悬液应保存在 4℃冰箱备用。尽量减少在室温下放置时间，以减少细菌自然死亡。应当天使用不得过夜。
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回收菌数为 1×10 ～9×10
cfu/ml 用 PBS液配备 GB15979- 《一次性使用卫生用品卫生原则》
回收菌数为 1× 108— 5× 108cfu/ml 用 TSB营养肉汤配备— 《消毒技术规范》
、菌片制备程序：《消毒技术规范》
⑴ 取冻干菌种管，在无菌操作下，以毛细吸管加入适量营养肉汤，轻柔吸吹多次，使菌种融化分散。
取含 - 营养肉汤培养基试管，滴入少量菌种悬液，置 37℃培养 18h～24h。用接种环取第 1 代培养菌悬液，划线于营养琼脂培养基平板上，于 37℃培养 18h～24h。挑取上述第 2 代培养物中典型菌落，接种于营养琼脂斜面，于 37℃培养 18h～24h，即为第 3 代培养物。
⑵ 取第 3 代～ 14 代营养琼脂培养基斜面新鲜培养物（经 18h～ 24h 培养），用吸管吸取
- TSB营养肉汤加入斜面试管内，重复吹吸，洗下菌苔。随后，用吸管将洗液移至另一
无菌试管中，在手掌上振敲 80 次，以使细菌悬液均匀，含菌量 1×108— 5× 108cfu/ml 。
⑶用无菌镊子夹住已灭菌 10mm*10mm滤纸一角，一面朝上，注入 10ul 菌悬液，放到无菌平板内， 37℃ 温箱中干燥 20min-30min ，（或在室温自然阴干后使用）制成菌片。每个菌片回收菌落，按活菌培养计数所得成果，应为 5× 105— 5× 106 cfu/片。）
⑷细菌繁殖体悬液和菌片，用毕应随时保存在 4℃冰箱内。尽量减少在室温下放置时间，以减少细菌自然死亡。（应当天使用不得过夜。）
3、操作程序
、悬液定量法杀菌实验操作程序
⑴、样品用无菌原则硬水稀释至同中和剂鉴定用试液浓度，或低于中和剂鉴定用试液浓度，制成（稀释液）实验样液。
⑵、将试管按需要数量分别排列于试管架上，各组由左向右，排序、标记。
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⑶、配制菌悬液，浓度为 1× 10 ～9×10
cfu/ml — GB15979-《一次性使用卫