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柱层析的操作步骤和注意事项.doc

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文档介绍:柱层析技术
常说过柱子应当叫柱层析分离,也叫柱色谱。咱们惯用是以硅胶或氧化铝作固定相
吸附柱。由于柱分经验成分太多,所如下面我就几年来过柱体会写些心得,但愿
能有所协助。
柱子可以分为:加压,常压,减压。
压力可以增长淋洗剂流动速度,减少产品收集时间,但是会减低柱子塔板数。所
以其她条件相似时候,常压柱是效率最高,但是时间也最长,例如天然化合物分
离,一种柱子几种月也是有。
减压柱可以减少硅胶使用量,感觉可以节约一半甚至更多,但是由于大量空气通过
硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝聚),以及有些比较易分解东西也许得
不到,并且还必要同步使用水泵抽气(很大噪音,并且时间长)。此前曾经大量过
减压柱,对它有比较深厚感情,但是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压念
头了。
加压柱是一种比较好办法,与常压柱类似,只但是外加压力使淋洗剂走快些。压力
提供可以是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气就行)。非凡是在容易分解
样品分离中合用。压力不可过大,否则溶剂走太快就会减低分离效果。个人觉得
加压柱在普通有机化合物分离中是比较合用。
关于柱子尺寸,应当是粗长最佳。

柱子长了,相应塔板数就高。柱子粗了,上样后样品原点就小(反映在柱子上就是
样品层比较薄),这样相对减小了分离难度。试想如果柱子十厘米,而样品就有二
厘米,那么分离难度可想而知,恐怕要用很低极性溶剂慢慢冲了。而如果样品层只
有0.5厘米,那么各组分就比较容易得到完全分离了。固然采用粗大柱子要牺牲比较多
硅胶和溶剂了,但是这些成本相对于产品来说也许就不算什么了(有些不环保说,
但是溶剂回收重蒸后也就减小了某些挥霍)。
当前见到柱子径高比普通在1:5~10,书中写硅胶量是样品量30~40倍,详细选
择要详细分析。如果所需组分和杂质分比较开(是指在所需组分rf在0.2~0.4,杂质
相差0.1以上),就可以少用硅胶,用小柱子(例如200毫克样品,用2cm×20cm柱子
);如果相差不到0.1,就要加大柱子,我觉得可以增长柱子直径,例如用3cm,也
可以减小淋洗剂极性等等。
关于无水无氧柱,合用于对氧,水敏感,易分解产品。
可以湿柱,也可以干柱。但是在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次,由于溶剂和硅
胶饱和时放出热量有也许是产品分解,究竟要分离是敏感东东,小心不为过。也
是由于分离东西比较敏感,因此接受瓶一定要用可密封,遵循schlenk操作。至于是
加压、常压、减压,随需而定。由于是schlenk操作,因此点板是个问题,如果样品是显
色,恭喜了,不用点板,直接看柱子上色带就行了。如果样品无色,只得预备几十
个schlenk瓶,一瓶一瓶点,但是几次之后就懂得样品在哪,也就可以省些了。像我以
前过一根无水无氧柱,需要六个schlenk,当前只一种就能把所要全收集到。
无水无氧柱中用比较多是用氧化铝作固定相。由于硅胶中有大量羟基裸露在外,
很容易是样品分解,非凡是金属有机化合物和含磷化合物。而氧化铝可以做成碱性、中
性和酸性,选取余地比较大,但是比硅胶要贵些。
据说有个办法,就是用石英做柱子,然后用HF254做固定相,这样在柱子外面用紫外灯一

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柱层析的操作步骤和注意事项.doc

上传人:读书之乐 2021/12/5 文件大小:18 KB

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