文档介绍：无菌检查操作规程
目
建立无菌检查原则操作规程，保证检查成果精确、可靠。
使用范畴
我司无菌产品无菌检查
职责
质量部QC
根据
《中华人民共和国药典》通则1101
GB/T -（ISO11737-2:1998）
《疗器械灭菌微生物学办法第 2某些：确认灭菌过程无菌实验》
GB/T -
《医用输液、输血、注射器具检查办法第 2某些：生物学实验办法》
内容
无菌检查环境保障
无菌检査所有操作均需在严格控制微生物污染环境下进行，即无菌检査应在环境干净度10000级下局部干净度100级单向流空气区域内或隔离系统中进行。
操作环境无菌保障限度将直接影响无菌检查成果，为了保证无菌检查用干净室（区）环境稳定性，保证检查成果可靠性，对干净室（区）环境定期监测并采用合理办法保证干净环境符合规定。
无菌检查全过程必要严格遵守无菌操作，防止微生物污染。
干净区温度、湿度等参数必要符合相应干净级别规定。
无菌检查操作还需要对检查环境进行监控，
培养基、稀释液、缓冲液
硫乙醇酸盐流体培养基，市售培养基干粉。除另有规定，接种后应置30~35℃培养。
胰酪大豆胨液体培养基，市售培养基干粉。接种后应置20~35℃培养。
中和或灭活用培养基，按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适当中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同办法合用性实验。
胰酪大豆胨琼脂培养基，市售培养基干粉。
沙氏葡萄糖液体培养基，市售培养基干粉。
沙式葡萄糖琼脂培养基，市售培养基干粉。
***化钠蛋白胨缓冲液，市售培养基干粉。
%无菌***化钠溶液。
培养基使用性检查
无菌检査用硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符培养基无菌性检査及敏捷度检査规定。本检查可在供试品无菌检査或与供试品无菌检査同步进行。
无菌性检查：每批培养基随机取5支（瓶），按各培养基规定温度下培养14天，应无菌生长。
敏捷度检查
菌种：培养基敏捷度检查所用菌株传代数不得超过5代(从菌种存中心获得干菌种第0代），并采用适当菌种保藏技术进行保存，以证明验菌株生物学特性。
金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]
铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104]
枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]
生孢梭菌[CMCC(B)64 941]
白色念珠菌[CMCC(F)98 001]
黑曲霉[CMCC(F)98 003]
菌液制备：接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30〜35℃培养18〜24小时；接种白色念珠菌培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20〜25℃培养24〜48小时，-%无菌化钠溶液制成每lml菌数不大于100cfu(菌落形成）菌悬液。接种黑曲霉培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，20〜25℃培养5〜7天，加人3〜5 ml %(ml/ml) -%无菌***化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适当办法吸出孢子悬液至无菌试管内，% (ml/ml)-%无菌***化钠溶液制成每lml孢子数量不大于100cfu孢子悬液。菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2〜8 ℃在24h 内使用。黑曲霉孢子悬液存在2〜8℃，在验证过贮存期内用。
培养基接种：取每管装量为12ml硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种不大于100cfu色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种不大于100cfu草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观测结。
成果鉴定：空白管应无菌生长，加菌管生长良好，阐明该培养基敏捷度符合规定。
办法试用性实验
进行产品无菌检查时，应进行办法合用性实验，以确认所采用办法适合于产品无菌检查。若检查程序或产品发生化也许影响检查成果时，应重新进行办法合用性实验。办法合用性实验按
“”规定及下列规定进行操作。对每一实验菌应逐个进行办法。
菌种及菌液制备：大肠埃希菌[CMCC(B)44 102]外，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉菌株及菌液制