文档介绍：蛋白质检测（参考GB/T6432-94）
一、原理
凯氏定氮法测定试样中含氮量，即在催化剂作用下，用浓硫酸破坏有机物，使含氮物转化为硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氮溢出，再用酸滴定，测出氮含量，，计算出粗蛋白含量。
二、试剂
硫酸 化学纯，含量为98%，无氮；
混合催化剂 ，含5个结晶水，6g硫酸钾或硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀；
氢氧化钠 化学纯，40%水溶液（m/V）；
硼酸 化学纯，2%水溶液（m/V）；
混合指示剂 ***%乙醇溶液，%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保留期为3个月；
盐酸标准溶液 基准无水碳酸钠法标定；
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蔗糖 分析纯；
硫酸铵 分析纯，干燥；
硼酸吸收液 1%硼酸水溶液1000mL，%溴甲酚绿乙醇溶液10mL，%***红乙醇溶液7mL，4%氢氧化钠水溶液，混合，置阴凉处保留期为1个月（全自动程序用）。
三、仪器设备
试验室用样品粉碎机或研钵；
分样筛 （40目）；
分析天平 ；
消煮炉或电炉；
滴定管 酸式，10、25mL；
凯氏烧瓶 250mL；
凯氏蒸馏装置 常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式；
锥形瓶 150、250mL；
容量瓶 100mL；
消煮管 250mL；
定氮仪 以凯氏原理制造各类型半自动、全自动蛋白质测定仪。
四、分析步骤
仲裁法
试样消煮 -1g（含氮量5-80mg）（），放入凯式烧瓶中，，和试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯式烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化、泡沫消失后，再加强活力（360-410℃）直至呈透明蓝绿色，然后再继续加热，消化全过程最少2h。
氨蒸馏
常量蒸馏法 将试样消煮液冷却，加入60-100mL蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置冷凝管末端浸入装有25mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂锥形瓶内。然后小心地向凯式烧瓶中加入50mL氢氧化钠溶液，轻轻摇动凯式烧瓶，使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体体积为100mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1-2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。
半微量蒸馏法 将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，作为试样分解液。将半微量蒸馏装置冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂锥形瓶内。蒸汽发生器水中应加入***红指示剂数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，不然需补充硫酸。正确移取试样分解液10-20mL注入蒸馏装置反应室中，用少许蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，预防漏气。蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。
注：两种蒸馏法测定结果相近，可任选一个。
蒸馏步骤检验